[发明专利]一种检测或预测老年痴呆病的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种检测样品中是否存在APOE^*4基因的方法，它包括步骤：

(a)用样品制备PCR反应模板；

(b)用检测APOE^*4基因的特异性引物和步骤(a)中模板，在特异性扩增条件下进行PCR扩增；

(c)对步骤(b)的PCR扩增产物进行酶切；

(d)对步骤(c)的PCR酶切产物进行电泳；

(e)根据步骤(d)的电泳结果判断APOE^*4基因的存在与否，其特征在于，

在制备模板的步骤(a)中，当样品为组织样品时，蛋白酶的用量为30-75μg/ml；当样品为抗凝血或血块样品时，蛋白酶的用量为0-50μg/ml。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(d)中，电泳条件为15-18％的非变性聚丙烯酰胺凝胶，电压150-200伏特，时间为1.5-2.5小时。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，该非变性聚丙烯酰胺凝胶的长度为8-15厘米。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，蛋白酶的用量为0μg/ml。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该蛋白酶选自：蛋白酶K或木瓜蛋白酶。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，所用的APOE^*4基因的特异性引物选自：Hixon引物，Wenham引物。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，PCR条件为：

(a)92-97℃(较佳地约96℃)预变性5分钟；

(b)为3-8个小循环：每个循环分别由三步组成：(1)66-69℃25-40秒；(2)71-73℃1.5-2.5分钟；(3)92-97℃25-40秒；

(c)28-35个主循环：每个循环分别由三步组成：(1)58-64℃25-40秒；(2)71-73℃1.5-2.5分钟；(3)先92-97℃25-40秒；

(d)71-73℃延伸5-10分钟。

8.一种检测APOE^*4基因的试剂盒，它含有制备模板所需的试剂、进行PCR扩增所需的试剂、进行酶切处理所需的试剂，其特征在于，在制备模板所需的试剂中用于制备1份样品的蛋白酶含量为0-50μg/ml。

9.如权利要求8所述试剂盒，其特征在于，该试剂盒不含有蛋白酶。

10.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，在进行PCR扩增所需的试剂中，所含的引物选自：Hixon引物，Wenham引物。