[发明专利]甲肝－麻疹二联疫苗及其生产方法

说明书

本发明涉及甲型肝炎-麻疹二联疫苗组合物及其冷冻干燥制剂。本发明进一步涉及制备所说的甲型肝炎-麻疹二联疫苗及其冷冻干燥制剂的方法。

自1991年由联合国儿童基金会和世界卫生组织等国际组织发起并推行“儿童疫苗计划”(Children’svaccine initiative,CVI)以来，世界上许多从事疫苗研究与开发的实验室和公司都在致力于新疫苗的研制。这些新疫苗应该是多价的、热稳定的，并且是可以以口服或气雾形式接种的。从临床应用角度看，人们希望通过使用联合疫苗，经一次注射即可免疫接种能够有效地预防两种或多种疾病的两种或多种病毒和/或细菌抗原，以降低接种费用、减少保健医生和防疫部门的工作量、简化计划免疫档案的保管，从而改善目前婴幼儿童免疫接种率低的现状。近年来，已被批准的新型联合疫苗是全细胞白百破(白喉、破伤风类毒素和百日咳联合制剂)与流感嗜血杆菌B组合而成的四联疫苗。另外，鉴于用同一个注射器投用混合疫苗制品的可行性，有关原则也已应用于在人体不同部位同时接种不同疫苗制剂的所谓“混合与配比”程序。然而，迄今为止尚没有涉及甲肝疫苗与其他病毒减毒活疫苗如麻疹疫苗组合以制备二联病毒活疫苗的报导，特别是还没有在同一敏感宿主细胞株内，相继接种两种病毒以制备二联病毒减毒活疫苗的报导。

因此，本发明的一个目的是提供甲型肝炎-麻疹二联疫苗组合物，所说的二联疫苗组合物含有彼此互不干扰的，分别具有预防有效的病毒滴度的甲型肝炎减毒活病毒和麻疹减毒活病毒，并且含有或不含病毒疫苗保护剂。

根据本发明的甲型肝炎-麻疹二联疫苗组合物，其中甲型肝炎活疫苗有效病毒滴度为10^5.5-7.0CCID₅₀/ml，麻疹活疫苗的有效病毒滴度为10^3.5-6.13CCID₅₀/ml。

根据本发明的甲型肝炎-麻疹二联疫苗组合物，所说的二联疫苗组合物是冷冻干燥形式的。

根据本发明的甲型肝炎-麻疹二联疫苗组合物，其中所说的病毒活疫苗保护剂由重量/体积比(w/v)为0-2％的人血清白蛋白、0.5-1％的明胶、5-10％的海藻糖、0.75-1.5％的谷氨酸钠、0.05-0.1％的抗坏血酸、0.5-2.8％的尿素、5-10％的山犁醇和0.5-1％的肌醇组成。

本发明的另一个目的是提供生产甲型肝炎-麻疹二联减毒活疫苗的方法，该方法包括将按常规方法增殖得到的病毒滴度为10^5.5-7.0CCID₅₀/ml的甲型肝炎减毒活疫苗原液与病毒滴度为10^3.5-6.13CCID₅₀/ml的麻疹减毒活疫苗原液按适当比例混合。

本发明的再一个目的是提供利用同一宿主细胞基质生产甲型肝炎-麻疹二联减毒活疫苗的方法，该方法包括以下步骤：

1)分别提供按常规方法传代减毒的甲型肝炎活疫苗病毒毒种和减毒的麻疹活疫苗病毒毒种；

2)用步骤1)中提供的减毒的甲型肝炎活疫苗病毒接种人胚肺二倍体细胞并在适当条件下培养所说的细胞以增殖病毒，当甲型肝炎病毒感染细胞的阳性感染率达到75％以上时，再次接种步骤1)提供的麻疹减毒活疫苗病毒并继续培养之；

3)当甲型肝炎病毒感染细胞的阳性率达到90％以上，并且90％以上的二倍体基质细胞出现麻疹病毒所致的典型细胞病变时，收获细胞并分离细胞培养物上清，得到所需的甲型肝炎-麻疹二联活病毒疫苗原液。

根据本发明这一目的的一个优选实施方案，其中所说的甲型肝炎病毒感染二倍体细胞基质的感染率是用标准的免疫荧光法监测的。

根据本发明这一目的的另一个优选实施方案，其中所说的方法进一步包括将按步骤3)得到的含甲型肝炎-麻疹减毒二联活疫苗病毒原液按大约1∶1的比例与适当的病毒活疫苗保护剂混合，并按常规方法冷冻干燥之。

根据本发明这一目的的一个优选实施方案，其中所说的病毒活疫苗保护剂基本上由重量/体积比(w/v)为0-2％的人血清白蛋白、0.5-1％的明胶、5-10％的海藻糖、0.75-1.5％的谷氨酸钠、0.05-0.1％的抗坏血酸、0.5-2.8％的尿素、5-10％的山犁醇和0.5-1％的肌醇组成。    

本发明的再一个目的是提供制备如上文限定的甲型肝炎-麻疹二联疫苗的冷冻干燥制剂的方法，该方法包括：

1)分别提供具有有效病毒滴度的甲型肝炎病毒活疫苗原液和麻疹病毒活疫苗原液，以得到混合的悬液形式的甲型肝炎-麻疹二联病毒活疫苗；