[发明专利]用大规模培养的麻黄细胞培养物作原料生产麻黄碱的方法

权利要求书

1.一种生产麻黄碱的方法，包括以下步骤：

(1)麻黄细胞(Ephedra)ZHJ-25CGMCCNo.0359继代培养，配制培养基，其组成如下：

硝酸钾    2.0—10.0MMOL/L     硫酸铜        0.0001—0.001MMOL/L

磷酸二氢钠0.3—5.0mmol/L      硫酸锌        0.001—0.01mmol/L

硫酸镁    0.5—3.5mmol/L    乙二胺四乙酸钠铁0.1—2.0mmol/L

硼酸钠    0.001—0.007mmol/L  动力精        0.001—0.01mmol/L

硫酸氨    0.5—2.0mmol/L      吲哚乙酸      0.001—0.01mmol/L

氯化钙    0.5—5.0mmol/L      蔗糖          1.0—10.0％w/v按比例将上述各种试剂放入一烧杯，水定容至500毫升，用碱调pH为5.8，再加入0.7％琼脂煮沸，分别装入50毫升三角烧瓶，每只三角烧瓶中装20毫升，封口膜封口，将其放入压力灭菌锅中，121℃灭菌15分钟，冷却后作为继代培养的培养基；

(2)继代培养：

采用麻黄细胞(Ephedra)ZHJ-25CGMCCNo.0359进行麻黄碱生产和继代培养。

2.按权利要求1所述的一种生产麻黄碱的方法，其特征在于：所述的培养基中还加入浓度为0.1—20mmol/L的苯丙氨酸。

3.按权利要求1所述的一种生产麻黄碱的方法，其特征在于：所述的培养基中还加入10—50％重量百分比的真菌发酵液，其浓度为10—50w/v。

4.按权利要求1—3中任意一项权利要求所述的一种生产麻黄碱的方法，其特征在于：所述的培养基中还加入0.6—0.7％重量百分比的琼脂。

5.按权利要求1—3中任意一项权利要求所述的一种生产内碱的方法，其特征在于：所述的培养基中还加入0.4—0.5mmol/L的维生素B。

6.按权利要求1—3中任意一项权利要求所述的一种生产麻黄碱的方法，其特征在于：所述的培养基中还加入0.078mmol/L的烟酸。

7.按权利要求1所述的一种生产麻黄碱的方法，其特征在于：所述的麻黄碱生产和继代培养是：固体培养、悬浮培养或生物反应器培养。

8.按权利要求7所述的一种生产麻黄碱的方法，其特征在于：所述的固体培养是：(1)将麻黄细胞接入已灭菌的装有20毫升固体培养基的50毫升三角瓶中；(2)在25±2℃培养10—15天，转入新配制的培养基中进行继代培养；(3)将麻黄细胞在同样的条件下培养20—50天，取出培养的细胞，60℃干燥，得到含有麻黄碱的原料；重复步骤(1)和(2)得到连续培养的麻黄细胞。

9.按权利要求7所述的一种生产麻黄碱的方法，其特征在于：所述的悬浮培养是：(1)将三角瓶中生长10—15天的麻黄细胞转入已灭菌的250毫升、500毫升或3000毫升的三角烧瓶中，其中装有100—1000毫升的液体培养基，摇床的转速为100—150rpm，在25±2℃培养13—16天；(2)将麻黄细胞在同样的条件下，培养20—50天，得到含有麻黄碱的原料；重复步骤(1)得到连续培养的麻黄细胞。

10.按权利要求7所述的一种生产麻黄碱的方法，其特征在于：所述的生物反应器培养是：(1)利用3升摇瓶进行继代培养的麻黄细胞转入一级生物反应器中进行培养，在25±2℃培养10—15天；(2)将上述反应器培养的麻黄细胞转入较前者有效体积大的生物反应器中进行培养，在25±2℃培养20—50天，得到麻黄细胞。