[发明专利]非水介质中稳定的多肽连接酶及制法和用途无效
| 申请号： | 98126744.0 | 申请日： | 1998-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN1258744A | 公开（公告）日： | 2000-07-05 |
| 发明（设计）人： | 杨永华;蒋岚;杨胜利 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海生物工程研究中心 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所 | 代理人： | 徐迅 |
| 地址： | 20023*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 介质 稳定 多肽 连接酶 制法 用途 | ||
1.一种多肽连接酶，它是枯草蛋白酶E的变体酶，其特征在于，它含有Ser221Cys、Met222Ala和Pro225Ala突变。
2.如权利要求1所述的多肽连接酶，其特征在于，它含有选自下组的突变：
Asn118Ser，和Ser24His/Lys27Asp/Ser236Cys。
3.如权利要求2所述的多肽连接酶，其特征在于，它包括变体酶BHG和BW。
4.如权利要求1所述的多肽连接酶，其特征在于，它具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
5.一种分离的DNA序列，其特征在于，它编码权利要求1所述的多肽连接酶。
6.如权利要求5所述的DNA序列，其特征在于，它包括选自下组的序列：SEQ ID NO.1。
7.一种表达载体，其特征在于，它含有权利要求5所述的DNA序列。
8.一种宿主细胞，其特征在于，它被权利要求7所述的表达载体所转化。
9.如权利要求8所述的宿主细胞，其特征在于，它是枯草杆菌BHG(AprE)CCTCC No.M98022。
10.一种生产权利要求1所述的多肽连接酶的方法，其特征在于，该方法包括步骤：
(a)将编码该多肽连接酶的DNA序列可操作地连于表达调控序列，形成多肽连接酶表达载体；
(b)将步骤(a)中的表达载体转化入宿主细胞；
(c)在适合表达该多肽连接酶的条件下进行培养，从而表达出该多肽连接酶；
(d)分离纯化出该多肽连接酶。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，在步骤(c)中所用的分离纯化条件是：将发酵上清用30％-60％硫酸铵沉淀，沉淀物用pH6.0-7.4的磷酸缓冲液溶解后经DEAE-Dextran A-25柱和Acrylex P-150柱。
12.如权利要求1所述的多肽连接酶的用途，其特征在于，它被用于非水介质中的多肽连接反应。
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