[发明专利]表达人白细胞介素12的重组腺病毒及其制法和用途有效
| 申请号： | 98126748.3 | 申请日： | 1998-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN1094974C | 公开（公告）日： | 2002-11-27 |
| 发明（设计）人： | 曹雪涛;章卫平;鞠佃文;陶群 | 申请（专利权）人： | 上海华晨生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;A61K39/235;A61P35/00 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所 | 代理人： | 徐迅 |
| 地址： | 200433 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达 白细胞 12 重组 病毒 及其 制法 用途 | ||
1.一种表达人白细胞介素12的重组腺病毒，其特征在于，该腺病毒的基因组缺失E1区和E3区，且在腺病毒基因组DNA的两端结合有末端肽TP，并且在E1区位置插入了人白细胞介素12表达盒，该表达盒依次包括：启动子序列，人白细胞介素12的p35和p40亚基编码序列和聚腺苷酸化信号序列。
2.如权利要求1所述的重组腺病毒，其特征在于，该IL-12表达盒中还含有内部核糖体结合位点IRES，而且p35亚基编码序列位于IRES之前，而p40亚基编码序列位于IRES之后。
3.如权利要求1或2所述重组腺病毒，其特征在于，该腺病毒为Ad5型腺病毒。
4.如权利要求1或2所述的重组腺病毒，其特征在于，人白细胞介素12表达盒中所含的启动子序列选自：巨细胞病毒启动子、牛乳头瘤病毒启动子。
5.如权利要求4所述的重组腺病毒，其特征在于，该腺病毒是表达人白细胞介素12的重组5型腺病毒Ad-hIL-12，CCTCC No.V98006。
6.一种药物组合物，其特征在于，它包括有效量的权利要求1所述的表达人白细胞介素12的重组腺病毒和药学上可接受的载体或赋形剂。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，该重组腺病毒为Ad5型腺病毒，且该IL-12表达盒中还含有内部核糖体结合位点IRES，而且p35亚基编码序列位于IRES之前，而p40亚基编码序列位于IRES之后。
8.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，该腺病毒是表达人白细胞介素12的重组5型腺病毒Ad-hIL-12，CCTCC No.V98006。
9.一种制备表达人白细胞介素12的重组腺病毒的方法，其特征在于，该方法包括：
(a)提供腺病毒DNA-TP复合物，在该腺病毒DNA基因组缺失E1区和E3区，并且在腺病毒基因组DNA的两端结合有末端肽TP；
(b)提供含腺病毒基因组的粘粒载体，在该粘粒载体中的腺病毒基因组缺失了E1区和E3区，并且在E1区位置插入了人白细胞介素12表达盒，其中该表达盒依次包括：启动子序列，人白细胞介素12的p35和p40亚基编码序列，和聚腺苷酸化信号序列；
(c)将步骤(a)中的腺病毒DNA-TP复合物和步骤(b)中的粘粒载体共转染表达E1区基因的宿主细胞；
(d)筛选阳性克隆；
(e)从阳性克隆中分离纯化重组腺病毒。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，在步骤(c)中共转染方法是磷酸钙DNA共沉淀转染法，该宿主细胞是293细胞，而且人白细胞介素12表达盒中所含的启动子序列选自：巨细胞病毒启动子、牛乳头瘤病毒启动子，且该IL-12表达盒中还含有内部核糖体结合位点IRES，而且p35亚基编码序列位于IRES之前，而p40亚基编码序列位于IRES之后。
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