[发明专利]仓鼠EF－1α转录调节DNA

说明书

                  发明背景

任何给定的真核基因的转录通过三种RNA聚合酶之一进行，其中的每一种对某些特定亚群的基因起作用。如果说通过RNA聚合酶Ⅰ进行大核糖体RNAs的转录而通过RNA聚合酶Ⅲ转录小核糖体RNA和tRNA，则编码蛋白质的DNA序列和大多数小的核RNA由RNA聚合酶Ⅱ转录。对每种类型的基因来说，转录需要所述聚合酶与所述基因启动子序列的相互作用并形成稳定的转录起始复合物。一般说，所述三种聚合酶之任何一种的转录还需要一些结合因子与所述启动子序列相互作用并需要通过第二个因子识别所述结合的因子，由此使聚合酶与所述基因序列相互作用。如果说这种机制是RNA聚合酶Ⅰ和Ⅲ的转录的最低需要，则导致RNA聚合酶Ⅱ转录的过程更为错综复杂。

据推测，由于通过RNA聚合酶Ⅱ转录的基因序列的量很大和由于在相同细胞内以及不同细胞间这些基因的调节模式千差万别的事实，除了其他结合蛋白与启动子以外的调节DNA序列相互作用外，由RNA聚合酶Ⅱ进行的转录还受起始复合物中许多转录因子的结合的影响。这些其他结合蛋白在一起可起激活高于基础水平转录或阻遏转录的作用。根据高等真核生物中基本转录通常很低的观察，阻遏物结合还可被认为是一种防止激活的方法。另一方面，激活通常是对某些生理信号的终末反应并且激活需要去除阻遏物结合蛋白或改变染色质结构以使形成活性转录起始复合物。

在转录复合物形成的核心(和基本水平的基因表达之先决条件)是被称为“TATA”盒的启动子序列，该序列位于聚合酶Ⅱ转录起点的上游。所述TATA盒是命名为TFIID的遍在转录因子的结合部位，但如所提到的，大多数基因中的启动子序列的转录主要受另外的调节DNA序列的影响，所述序列可增强或阻遏基因转录。这种类型的DNA转录元件位于与基因中编码序列和与TATA盒有关的各种位置。这些另外的转录调节元件常以组织或细胞特异性方式发挥功能。

在重组蛋白质表达中，特别重要的是筛选调节DNA，它包括启动子TATA序列和与宿主细胞转录机制相容的其他调节元件。为此，一般优先选择对宿主细胞是内源的DNA。或者，由于病毒一般有宽宿主范围和已证明的病毒调节DNA在不同细胞型中活性，使用来自病毒基因组序列的调节DNA业已取得了显著成功。例如，众所周知的和常规利用的用于重组蛋白质表达的病毒调节DNA包括SV40早期基因启动子/增强子[Dijkema等，EMBO J.4:761(1985)],Rous肉瘤病毒长末端重复DNA[Gorman等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)79:6777(1982b)]，牛乳头状瘤病毒片段[Sarver等，Mo.Cell.Biol.1:486(1981)]和人巨细胞病毒启动子/增强子元件[Boshart等，Cell 41:521(1985)]。尽管已经证明的病毒调节DNA在其中是有功能的细胞型的范围较宽，有可能存在非病毒启动子/增强子DNA元件，它们通过更有效的使用宿主细胞转录机制使特异性细胞系中重组蛋白质表达上升。

因此本领域存在一种鉴定同源和异源细胞型中有功能的启动子/增强子调节DNA序列的需要以增加重组蛋白质表达和提供高产率的所需要的蛋白质产物。其中特别重要的是需要鉴别可在哺乳动物细胞中被最有效利用的那类启动子/增强子调节DNA以增加重组蛋白质的体外产量，所述蛋白质以类似于体内蛋白质表达所产生的糖基化模式的方式被糖基化。以此方式表达并在治疗或预防上施用的蛋白质不大可能有抗原性而更可能具有生理活性。此类型的调节DNA序列还易于被插入宿主细胞以增强对宿主细胞是内源的基因之表达或增强通过本领域熟知并常规应用的技术被事先引入宿主细胞基因组的基因之表达。

                  发明概述