[发明专利]鉴别在G蛋白偶联体系中起作用的植物蛋白的方法和组合物

权利要求书

1.一种鉴别植物蛋白的方法，该植物蛋白被怀疑是G蛋白偶联型细胞信号系统中的G蛋白亚基或复合物，或者作用方式与其类似，其特征在于，它包括步骤：

(a)提供含有编码待鉴别的靶植物蛋白的核苷酸序列的宿主细胞；

(b)将存在于该宿主细胞中且怀疑必然与靶植物蛋白有关的所有和部分G蛋白亚基复合物的内源组份失活；

(c)让该宿主细胞生长；和

(d)在该宿主细胞中G蛋白偶联型细胞信号传导途径的必然内源组份的功能性表达不存在时，测量生长情况，作为待鉴别的植物蛋白是否在该宿主细胞中发挥功能的指示。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该植物蛋白的全部或一部分是G蛋白亚基。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(b)的内源组份是Gα亚基，而该待鉴别的植物蛋白包括植物Gα亚基。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(b)的内源组份是Gβ或Gγ亚基或Gβγ复合物，而该待鉴别的植物蛋白包括Gβ或Gγ样蛋白或Gβγ样复合物。

5.如权利要求1-4中任一权利要求所述的方法，其特征在于，该宿主细胞是酵母细胞。

6.一种鉴别植物蛋白的方法，该植物蛋白被怀疑是细胞信号途径的G蛋白偶联受体组份，或作用方式与其类似，其特征在于，它包括步骤：

(a)提供含有编码待鉴别的植物蛋白的核苷酸序列的宿主细胞，其中该宿主细胞具有有功能的G蛋白亚基复合物；

(b)让该宿主细胞在合适的条件下生长；和

(c)测量生长情况，作为待鉴别的植物蛋白是否与该G蛋白亚基复合物作用从而在该宿主细胞的细胞信号途径中发挥功能的指示。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，该G蛋白复合物的至少一部分是衍生自植物的。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，该G蛋白亚基复合物选自主要由下列物质构成的组：植物G蛋白、嵌合的哺乳动物/植物G蛋白、嵌合的酵母/植物G蛋白、和三聚体式的酵母/植物/哺乳动物G蛋白。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，该G蛋白亚基是Gα。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，该宿主细胞是酵母细胞。

11.用权利要求7方法转化的宿主细胞。

12.一种转化的宿主细胞，其特征在于，它含有编码用于植物蛋白的第一核苷酸序列和编码全部或部分G蛋白复合物的第二核苷酸序列，其中至少一部分G蛋白复合物是衍生自植物的。

13.如权利要求12所述的转化的宿主细胞，其特征在于，该第二核苷酸序列编码的Gα蛋白选自主要由下列物质构成的组：植物Gα、嵌合的哺乳动物/植物Gα、嵌合的酵母/植物Gα、和三聚体式的酵母/植物/哺乳动物Gα。

14.一种核苷酸表达载体，其特征在于，它能够将权利要求13所述的异源植物蛋白表达到宿主细胞的细胞膜中。

15.一种核苷酸表达载体，其特征在于，它能够在宿主细胞中表达权利要求1中所述的植物蛋白。

16.如权利要求14或15所述的表达载体，其特征在于，该宿主细胞是酵母细胞。

17.一种分析物质以确定配体结合于异源植物G蛋白偶联受体所产生的效应的方法，其特征在于，该方法包括步骤：

(a)提供细胞，该细胞表达异源植物G蛋白偶联受体并且还含有G蛋白复合物，其中至少一部分G蛋白复合物是衍生自植物的；

(b)将选定物质与该细胞接触，以便让该物质与表达的异源G蛋白偶联受体作用；

(c)测定该细胞的生长，作为与该物质的相互作用是否调制异源G蛋白偶联受体的指示。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，该G蛋白复合物包含植物Gα。