[发明专利]活性蛋白C制剂

说明书

本申请要求1997年4月28日申请的美国临时申请60/045255的优先权。

发明领域

本发明涉及人类药物领域，特别涉及用活性蛋白C治疗血管疾病。更具体地说，本发明涉及活性人蛋白C的制剂。

发明背景

蛋白C是丝氨酸蛋白酶和天然存在的抗凝剂，其通过在凝结级联反应中灭活因子Va和VIIIa而调节体内稳态。人蛋白C体内主要在肝脏中合成，是单一的461个氨基酸的多肽。这个单链母体分子经历多个翻译后修饰，包括1)裂解42个氨基酸信号序列；2)蛋白酶解从一个链酶原去除位置156处的赖氨酸残基和位置157处的精氨酸残基，制备成2-链酶原形式的分子(即通过二硫桥与含有丝氨酸蛋白酶的262个氨基酸残基的重链连接的155个氨基酸残基的轻链)；3)在轻链的前42个氨基酸中聚簇的9个谷氨酸残基的维生素K-依赖性羧化作用，产生9个γ-羧基谷氨酸残基；和4)在4个位点(一个在轻链中和三个在重链中)连接碳水化合物。重链含有已充分研究的Asp257，His211和Ser360丝氨酸蛋白酶三联体。最后，成环的2-链酶原在钙离子存在下在磷脂表面被凝血酶体内激活。激活作用来自去除重链的N-末端处的十二肽，产生具有酶活性的活性蛋白C(aPC)。

除了血液凝结级联反应中aPC的酶活性外，aPC也可以自身降解，导致作为一种抗凝剂的降低的功能性。申请人发现了重要的降解途径。轻链的N-末端的自身降解可以导致位置10处组氨酸残基任一侧上的切断。这样，该降解途径得到两种灭活产物；1)去(1-9)活性蛋白C，其中去除了轻链的前9个N-末端残基；和2)去(1-10)活性蛋白C，其中去除了轻链的前10个N-末端残基。该降解途径先前没有报道过，其由于去除位置6和7处的重要的GLA残基而导致抗凝活性降低。因此，降低去(1-9)和去(1-10)活性蛋白C自身降解产物水平在获得强效高纯度的活性蛋白C药物制剂中是重要的。这些变体产物是先前未知的降解产物，并且通过常规纯化技术是非常难以去除的。申请人进一步发现在选定的一组填充剂的存在下固态溶解性明显提高。

十分期望将溶液和冻干固态中的活性蛋白C的这样的降解最小化。因此，这些发现允许制备对于健康护理从业者来说是优良药物的强效高纯度的活性蛋白C制剂。

本发明提供基本上没有这样的自身降解产物特别是活性蛋白C的轻链的去(1-9)和去(1-10)形式的改进的活性蛋白C的制剂。因此，所说的制剂适合对需要它的患者给药。

发明概述

本发明提供含有活性蛋白C和选自甘露糖醇，海藻糖，棉子糖，蔗糖及其混合物的填充剂的稳定冻干制剂。

本发明还提供含有大约2.5mg/ml活性蛋白C，大约15mg/ml蔗糖和大约20mg/ml氯化钠的稳定冻干制剂。此外，本发明提供含有大约5mg/ml活性蛋白C，大约30mg/ml蔗糖和大约38mg/ml氯化钠的稳定冻干制剂。

本发明还提供了制备含有活性蛋白C和选自甘露糖醇，海藻糖，棉子糖，蔗糖及其混合物的填充剂的制剂的方法。

本发明还提供单位剂量形式，包括含有制剂的单位剂量容器，所述制剂中重量与重量比例是大约1份活性蛋白C，大约7.6份盐和大约6份填充剂。

本发明进一步提供治疗涉及血管内凝结的疾病状态的方法，包括给予这里所描述的活性蛋白C的制剂。

发明详述

为了本发明目的，按照这里所公开的和权利要求书所要求的，下面的术语如下定义。

aPC或活性蛋白C指或者重组或者血浆产生的活性蛋白C。aPC包括和优选是人活性蛋白C，但是aPC也可以包括具有蛋白C的蛋白水解活性，酰胺水解活性，酯水解活性和生物活性(抗凝剂或血纤维蛋白溶酶原)的其它种类或衍生物。蛋白C衍生物的例子描述于Gerlitz等美国专利5453373和Foster等美国专利5516650，其中全部内容在这里引作参考。

APTT--激活的部分组织促凝血酶原激酶时间。

r-hPC--重组人蛋白C酶原。

r-aPC--通过体外或体内激活蛋白C酶原或者通过从原核细胞，真核细胞或者转基因动物直接分泌激活形式的蛋白C来制备的重组活性蛋白C，包括，例如从人肾293细胞分泌酶原后根据本领域技术人员公知的和在Yan的美国专利4981952和Cottingham的WO97/20043中证明的技术纯化和激活，这两篇专利全部在此引作参考。

连续灌输--基本上不间断地连续将溶液灌注到血管中，灌注一段特定时间。

大丸剂注射--以确定量(称之为大丸剂)一次注射药物。