[发明专利]通过膈下内吸收途径使用的抗螺杆菌疫苗组合物,以及粘膜/非肠道联用免疫方法

说明书

本发明的目的是使用疫苗制备物在哺乳动物中特效诱导针对感染粘膜的病原有机体保护性免疫反应，具体地说是螺杆菌属(Helicobacter)细菌。

螺杆菌是细菌的一个属，其特征为革兰氏染色阴性的螺旋状细菌。其中几个种位于哺乳动物的胃肠道。其中尤其值得一提的是幽门螺杆菌(H.pylori)，H.heilmanii，H.filis和鼬鼠螺杆菌(H.mustelae)。H.pylori是最经常与人类的感染相关的，但在一些罕见的病例中也可能分离到H.heilmanii和H.felis。螺杆菌类型的一种细菌，Gastrospirillumhominis在人类中也有报道。

螺杆菌对成年人口的感染率在发达国家为50％，而在发展中国家接近100％。这表明其为全世界范围的主要感染源。

目前为止，在人类中仅在腹部的粘膜表面，特别是在十二指肠溃疡和胃部的火山型伤口附近，发现H.pylori。这种细菌被认为是窦胃炎(antral gastritis)的原初致病因子并且是发展的溃疡所需的辅助因子之一。并且，胃癌的发生可能和H.pylori的作用相关。

因此发展防止或治疗螺杆菌感染的疫苗是非常合乎需要的。

目前，几种螺杆菌的蛋白已被提出做为疫苗抗原的候选。并且通常建议使用的接种疫苗的方法包括将抗原送达胃粘膜水平，即免疫应答发生的预期位点，为了达到这些目的，选择了口腔(oral)的方式。

同样为了这一目的，即在胃部水平上引导免疫应答，最近提出将抗原送达胃粘膜以外的粘膜，如鼻腔或直肠粘膜，的粘膜位点，例子见(WO 96/31235)。淋巴细胞被所谓的诱导粘膜区的抗原激活后能选择性地迁移和循环以到达所谓的效应粘膜区产生免疫应答。

这些方法的变例包括在通过鼻腔途径施用抗原之前通过内吸收途径进行第一次免疫。

对于通过粘膜途径施用的抗原(经常为细菌裂解物或纯化的蛋白)常常和适当的佐剂如霍乱毒素(CT)或来自E.coli的热不稳定毒素(LT)联用。

当使用粘膜途径时，观察到的体液与应答的类型主要为IgA型。这事实表明发生了区域免疫应答。

一些作者很早就考虑过，在保护性效果和强IgA型应答之间有很好的相关性(Czinn et.al.Vacinne(1993)11：637)。其他人给出了更保守的意见(Bogstedt et.al.，Clin.Exp.Immunol.(1996)105：202)。尽管目前为止这一问题还没有真正的定论，对于大多数作者而言诱导特定的IgA型抗体似乎是合乎需要的。

通常而言，IgA的产生意味着II型T辅助淋巴细胞产生应答(Th2应答)。

事实上，一种特定抗原对T辅助淋巴细胞的激活可能得到不同亚群的T辅助细胞，这些亚群的特征是不同的细胞因子合成类型。

具体而言，Th1细胞选择性地产生白介素-2(IL-2)和干扰素-γ(TFN-γ)，而Th2细胞优先分泌IL-4，IL-5和IL-10。由于它们在产生细胞因子上的分化，这两种类型的T辅助细胞扮演两种不同的角色：Th1细胞促进细胞介导的免疫，如炎症类型的应答；而Th2细胞促进IgA，IgE和一些IgG亚型类型的应答。已知由小鼠Th1细胞产生的细胞因子能促进抗体应答，具体地说，IFN-γ诱导IgG2a应答。这样，根据先前技术中的各种研究来看，特征为IgA的出现的Th2应答对于保护效应如果不是充分的也是必要的。

让人惊奇的是，现在发现Th2应答纵然是无害的，还必需诱导高效的Th1应答。事实上，现在实验结果表明Th1应答比Th2应答更易于与保护效应相关。

与最初的探索相反(D’Elios et al.，J.Immunol.(1997)158：962)，本申请揭示在免疫时间内诱导炎症型的Th1应答的重要性，没有它则不能观察到保护效应。

因此，本发明的目的是：

(i)衍生于感染哺乳动物的胃十二指肠粘膜的微生物，如从螺杆菌的免疫原性物质在生产用于诱导抗上述微生物，如螺杆菌的Th1-型免疫应答的药用组合物中的应用，这种组合物用以治疗或防止哺乳动物中的感染，如螺杆菌感染；

(ii)一种方法，该方法用于治疗或防止由有能力感染哺乳动物胃十二指肠粘膜的微生物促进的感染，如螺杆菌的感染。根据这种方法对哺乳动物一次或多次施用来源于上述微生物，如来源于螺杆菌的免疫原性物质，从而诱导抗，例如，螺杆菌的免疫应答。