[发明专利]有胺氧化酶活性的血管粘着蛋白－1

说明书

                      发明领域

本发明涉及编码一种新型人内皮细胞粘着蛋白的核酸，这种被称之为VAP-1的蛋白质具有粘着功能和胺氧化酶活性。本发明还涉及VAP-1核酸与多肽的使用。

                      发明背景

血液和组织之间的淋巴细胞的连续再循环是免疫系统发挥功能的关键。这个过程容许淋巴细胞巡查全身各位点，同时使它们发育并程序化其对特化的微环境组织间隙中来自抗原性威胁之反应。随后，淋巴细胞能专一返回(归巢)到其遇到抗原的位点，由此增强免疫反应的敏感性。循环淋巴细胞上的多受体及其在毛细管后微静脉中内皮细胞表面表达的配体之间的粘着性相互作用既提供了迁移过程的方式又提供了选择性控制所述过程的途径。虽然，近期在描述循环白细胞从自由流动的血液进入组织所需要的级联反应方面已取得很大进展，该过程中的许多内容尚有待发现。特别是，近期了解到的粘着分子的功能不足以定义迄今在正常与炎症环境中所定义的全部个体再循环途径和结合特异性。

本理论提示了白细胞粘着到内皮细胞的一个多步骤模型，所述模型依赖于数个受体配体对之间顺序的而非重叠的分子相互作用的级联反应(Butcher，E.G.and Picker，L.J.，Science 272：60-66(1996)：Springer，T.A.，Cell 76：301-314(1994))。血流中的白细胞与血管壁之间的初始瞬间和有限范围内的相互作用主要通过选择蛋白及其糖蛋白配体进行。整联蛋白和其他分子也可在此相中起作用。在适当信号存在时，继这种周而复始的尝试步骤之后的是通过激活整联蛋白与其Ig超家族配体的结合而调节的牢固粘着。局部上升的固定化细胞因子和其它趋化物水平可能与起始该局部反应有关，所述反应受适当受体和随后的细胞内信号转导的调节。最后的阶段包括所述结合的细胞通过尚不清楚的机制从内皮内衬向组织的迁移。组织特异性再循环途径依赖于具体粘着分子受体-配体复合物在所述适当位点的调节性表达。

我们先前已经描述了单克隆抗体(MAb)，1B2，它识别新型人内皮细胞粘着分子并可阻断淋巴细胞与冷冻切片检测中的扁桃腺高端内皮微静脉(HEV)的结合(Salmi，M.，and Jakanen，S.，Science257：1407-1409(1992)；美国专利号5,512,442和5,580,780和美国申请号08/447,799，此处全部引用做参考)。Mab 1B2对血管粘着蛋白-1(VAP-1)是特异的并由此而定义。在炎症环境中，VAP-1的表面表达被诱导并且其分子在血管内皮细胞的管腔表面被发现(Salmi，M.，等，J.Exp.Med.178：2255-2260(1993))。通过扁桃体组织的MAb 1B2免疫沉淀可检测出两种VAP-1，一种是90KD，而另一种是170-180KD。然而，在非还原条件下的免疫印迹后，主要是170-180KD种类(Salmi，M.，and Jalkanen，S.，J.Exp.Med.183：569-579(1996))。还可在其他位点发现有略微不同分子质量的免疫反应性VAP-1，特别是在血管平滑肌细胞和其他含平滑肌细胞的组织中，尽管其在这些细胞中的功能尚未确定。McNab等已报道VAP-1在肝窦状内皮上表达并可调节与T淋巴细胞的结合(McNab，G.等，Gastroenterology 110：522-528(1996))。用特异性糖苷酶消化扁桃体VAP-1的研究已表明VAP-1是一种唾液酸糖蛋白，可能含有丰富α2，3和α2，6连接型唾液酸残基的N-和-O联糖。该研究还表明在剪切条件下，VAP-1以唾液酸依赖的方式调节淋巴细胞与淋巴细胞组织中的HEV的结合，因为脱唾液酸的分子可能不再支持淋巴细胞在冷冻切片检测中的结合(Salmi，M.，and Jalkanen，S.J.Exp.Med.183：569-579(1996))。在皮肤，肠道和滑膜疾病引发的一些炎症条件下，所述分子受到正调节，尽管引发这种现象的调节因子尚未鉴定出(Arvilommi，A-M.，等，Eur.J.Immunol.26：825-833(1996)；Salmi，M.等J.Exp.Med.178：2255-2260(1993))。虽然VAP-1与PNAd均可调节淋巴细胞与PLN在剪切条件下的结合，VAP-1与MAbMECA-79定义的PLN(外周淋巴结)地址素(PNAd)是不同的。然而，与PNAd相比，VAP-1可以L选择蛋白非依赖方式发挥功能并支持L选择蛋白阴性淋巴细胞的结合(Salmi，M.，andJalkanen，S.，J.Exp.Med.183：569-579(1996))。因此，VAP-1是有以不依赖于已知选择蛋白的新型操作方式发挥重要粘着功能的分子并且可调节淋巴细胞与PLN型HEV结合中的早期相互作用。