[发明专利]用于诊断和治疗的呼吸道合胞病毒表位和含有它们的抗体

说明书

本发明涉及呼吸道合胞病毒，特别是鉴定可用于由该病毒所致疾病的治疗、预防和诊断领域的新表位和相应的抗体。

呼吸道合胞病毒(RSV)是常见于婴儿和老人中的病原体。细支气管炎常是儿童中严重的疾病，需要住院治疗。现在还没有预防由RSV引起的疾病的方法，RSV的第一次感染并不能阻止以后的感染。抗生治疗(Ribayirine)和/或结合免疫治疗(人免疫球蛋白)对于重病例并不能减轻病情。而且这类治疗一直是很昂贵的。用ORAVAX的HNK20单克隆抗体(抗RSV的F蛋白)最近进行的临床试验表明，与安慰剂相比对儿童的RSV感染没有治疗效果。在60年代曾试图用以甲醛灭活的RSV疫苗对儿童接种，结果是病情加重而非保护肺对抗RSV的自然感染。与此问题相关，现在的诊断试剂并不能可靠地鉴定RSV的感染，至少在成人中是如此。

RSV被归于副粘病毒科，肺病毒属，含有非节段负极性RNA基因组，编码10种特异蛋白。

专利申请WO 87/04185提出在疫苗中使用RSV的结构蛋白，如称为蛋白F(融合蛋白)或蛋白G的包膜蛋白、22Kd的糖蛋白、9.5Kd的蛋白或衣壳的主蛋白(蛋白N)。

专利申请WO 89/02935描述了RSV的全蛋白F的保护特性，其以单体形式或脱糖化形式被修饰或未修饰。

已克隆了蛋白F的一系列片段以研究它们的中和特性。

WO 95/27787证明RSV的蛋白G可用于制备治疗和/或预防RSV(A或B亚型)所致感染的产品。

本发明现发现含有特定表位的RSV病毒蛋白G的片段具有特别有利的性质。因而可以制备RSV蛋白G的许多新肽片段，特别用于以下应用：

(i)通过化学方法或通过遗传工程与载体偶联或融合的所述肽片段构成对抗RSV感染的有效疫苗，而无论疫苗施用方式如何；

(ii)这些同样的肽片段用于产生在RSV感染宿主的预防或治疗中很有效的多克隆抗体和单克隆抗体；

(iii)这些肽片段和单克隆抗体用作诊断试剂盒中的反应物，该试剂盒可用于显示和确认RSV-A或RSV-B感染的宿主感染。

本发明的目的是提供抗RSV蛋白G之表位的多克隆抗体或单克隆抗体，所述表位相当于选自RSV A或B蛋白G全序列中150-159、176-189、194-207和155-176氨基酸残基间肽序列或具有至少80％、优选至少98％相同性的序列的一种序列。

这些抗体能识别A亚型或B亚型RSV蛋白G的130-230氨基酸残基间序列所含有的肽。

相应于RSV A蛋白G 130-230氨基酸的该区域以下称为G2Na。G2Na在细菌如大肠杆菌中产生，因而是非糖基化的。它可提供抗RSV感染的免疫保护，特别是当它与一种载体偶联时，载体如为革兰氏阴性菌如克雷伯氏菌的OmpA(蛋白p40，描述于WO 96/14415)或衍生自链球菌的蛋白(如与人血清白蛋白结合的蛋白，以下称为BB，描述于WO96/14416)。

已令人意外地证明，按本发明制备的一系列肽提供抗A亚型或B亚型RSV的交叉保护。

尤其是，重组蛋白BBG2a1在BALB/c小鼠中提供RSV-A或RSV-B的交叉保护，BB2a1是BBG2Na的一种衍生物，其中仅在G2Na基础上修饰了4个残基：残基Asn(aa191)、Lys(aa192)、Gly(195)和Thr(aa198)分别被残基Ser、Asn、Lys和Pro置换。为了提高交叉保护的相同目的，制备了两种新分子：BBG2a2，其中残基Asn(aa157)、Asn(aa160)、Asn(aa161)和Phe(aa163)分别被残基Lys、Lys、Asp和Tyr置换；BBG2a3，其含有BBG2a1和BBG2a2的8个修饰氨基酸。

按照本发明特别有利的肽具有选自下列序列的一种序列：在附件中给出的SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9、SEQ ID No.10、SEQ ID No.11、SEQ ID No.12、SEQ ID No.13、SEQ IDNo.14、SEQ ID No.15、SEQ ID No.16、SEQ ID No.17、SEQ ID No.18、SEQ ID No.19、SEQ ID No.20、SEQ ID No.21和/或SEQ ID No.22，这种肽另外还可以在N-末端或C-末端处含有至少一个半胱氨基酸残基。