[发明专利]造血祖细胞长时培养的方法和设备

权利要求书

1.一种造血祖细胞的体外培养方法，包括：

引入一定量的造血祖细胞到含相互连接的孔的多孔的固体基质中，孔的大小足以允许所说的细胞在整个基质中生长，和

在不含接种基质细胞，基质细胞调节培养基，和外源加入的促进造血细胞保持，扩增和/或分化的造血细胞生长因子，除了血清的环境中培养所说的细胞。

2.根据权利要求1的方法，其中环境不含白介素3，6和11，干细胞配体和FLT/FLK生长因子。

3.根据权利要求1的方法，其中环境不含造血细胞生长因子。

4.根据权利要求1的方法进一步包括：

在所说的引入步骤前，从血液产品中获取造血祖细胞。

5.根据权利要求4的方法，其中所说的血液产品是未分级的骨髓。

6.根据权利要求2的方法，其中造血祖细胞在一些条件下培养足够长的时间以增加造血祖细胞的量，与引入到所说的多孔固体基质中的量相比。

7.根据权利要求1的方法进一步包括：

在所说的培养步骤之后，收获造血细胞。

8.根据权利要求7的方法，其中所说的收获步骤包括：

第一培养步骤之后的第一收获步骤和至少一个其他培养步骤之后的至少一个其他收获步骤。

9.根据权利要求7的方法进一步包括：

在从下列基团中选取的至少一种外源加入试剂中培养所说的收获的造血细胞：促进造血细胞保持，扩增和/或分化的造血细胞生长因子，接种基质细胞和基质细胞调节培养基。

10.根据权利要求8的方法进一步包括：

在存在外源加入试剂的情况下，培养从所说第一收获获取的造血细胞。

在存在外源加入试剂的情况下，培养从所说至少一个其他收获获取的造血细胞。

其中所说的外源加入试剂是从下列基团中选取的：包括促进造血细胞保持，扩增和/或分化的造血细胞生长因子，接种基质细胞和基质细胞调节培养基。

11.根据权利要求1-10的方法，其中多孔固体基是开放式细胞多孔基质，具有开放空间至少75％。

12.根据权利要求11的方法，其中多孔固体基质的孔是由相互连接的韧带界定的，韧带中心点直径平均小于150μm。

13.根据权利要求12的方法，其中多孔固体基质是含碳材料的金属覆盖的网状开放式细胞泡沫。

14.根据权利要求13的方法，其中金属是从下列基团中选取的钽，钛，铂，铌，铪，钨和它们的组合物，其中所说金属是由下列生物试剂覆盖的，包括胶原质，纤维结合蛋白，层粘连蛋白，整联蛋白，血管生成因子，抗炎症因子，粘多糖，vitrogen，它们的抗体和片段，和它们的组合物。

15.根据权利要求14的方法，其中金属是钽。

16.根据权利要求1-10的方法，其中含种植的造血祖细胞和它们子代的多孔固体基质用凝胶状试剂充满占据基质的孔。

17.一种体外培养造血祖细胞产生造血源分化细胞的方法，包括：在第一培养步骤，在不含接种基质细胞，基质细胞调节培养基，和外源加入的促进造血细胞分化的造血细胞生长因子，除了血清的环境中培养第一量的造血祖细胞，在一些条件下培养足够长的时间以增加造血祖细胞的量或集落形成单位潜能，与所说的第一量相比，从而产生第二量的造血祖细胞，然后在第二培养步骤中，在包括至少一种从下列基团中选取的试剂的环境中：促进造血细胞保持，扩增和/或分化的造血细胞生长因子，接种基质细胞，基质细胞调节培养基，培养至少部分第二量的造血祖细胞以产生造血源分化细胞。

18.根据权利要求17的方法，其中所说的第一培养步骤的环境不含白介素3，6和11，干细胞配体和FLT/FLK配体生长因子。

19.根据权利要求17的方法，其中环境不含造血细胞生长因子。

20.根据权利要求1 7的方法，其中第二培养步骤是多个第二培养步骤，每个包括培养仅部分所说的第二量的造血祖细胞。