[发明专利]制备(2R,3S)－3－(4－低级烷氧基苯基)－缩水甘油酸酯的方法

说明书

本发明涉及用外消旋反式-3-(4-低级烷氧基苯基)-缩水甘油酸酯的不对称酰胺化作用制备(2R，3S)-3-(4-低级烷氧基苯基)-缩水甘油酸酯的方法和用同样方式制备(2S，3S)-1.5-苯并噻唑品(benzothiazepine)衍生物的方法。

众所周知，(2S，3S)-1.5-苯并噻唑品(benzothiazepine)衍生物类，例如，盐酸硫氮酮(diltiazem)盐酸盐(化学名称：(2S，3S)-2-(4-甲氧基苯基)-3-乙酰氧基-5-[2-(二甲氨基)乙基]-2，3-二氢-1，5-苯并噻唑品(benzothiazzepine)4(5H)-酮盐酸盐)等。作为钙通路阻滞剂它们广泛地用于心绞痛、原发性高血压的治疗，利用(2R，3S)-3-苯基缩水甘油酸酯有利于制备这类化合物(见日本专利公报No.13776/1985和No.145174/1996和美国专利No.4,885,375)。

同样众所周知，脂肪酶SP523(商品名，来自NoVo Nordisk，丹麦)作用外消旋反式-3-(4-甲氧基苯基)缩水甘油甲酯(PCT公报No.WO 95/07359)使(2S，3R)-3-(4-甲氧基苯基)-缩水甘油甲酯发生不对称酰胺作用，可是该方法中，酶的选择性和活性是低的。

本发明仔细地研究了酰胺化的外消旋反式-3-(4-低级烷氧基苯基)-缩水甘油酸酯类，具有反应速度快和好的立体选择性。

根据本发明人研究，发现外消旋反式-3-(4-低级烷氧基苯基)-缩水甘油酸酯与氨或低级烷基胺在沙雷氏菌属(Serratia)产生的一种酶作用下发生不对称酰胺化作用，从反应的混合液中收集和分离余留的酯，在很短的时间内能高效地生产(2R，3S)-3-(4-低级烷氧基苯基)-缩水甘油酸酯，从而完成了本发明。

本发明提供了一种制备用下式(III)表示的(2R，3S)-3-(4-低级烷氧基苯基)-缩水甘油酸酯的方法：其中，R¹表示一种低级烷基和R表示一种酯残基，该方法包括：

(a)将一种由(I)式表示的外消旋反式-3-(4-低级烷氧基苯基)-缩水甘油酸酯：其中，R¹和R具有与上文所述相同的定义，在由属于沙雷氏属(genus Serratia)微生物得到的一种能够将(2S，3R)-3-(4-低级烷氧基苯基)-缩水甘油酸酯化合物进行不对称酰胺化作用，而将(2S，3R)异构体进行立体选择性地酰胺化的酶的存在下，与一种由下式(II)表示的胺化合物作用：

R²NH₂    (II)其中，R²表示氢原子或一种低烷基。

(b)然后，分离，收集反应混合液中余留的(2R，3S)-3-(4-低级烷氧基苯基)-缩水甘油酸酯。

如下描述本发明的优选实施方案。

在本发明的方法中，(I)式中的R¹表示的低烷基优选包括具有1至4个碳原子的烷基，如：甲基，乙基、丙基、正丁基等，最好为甲基。由R表示的酯基可以包括烷基，该烷基可以具有取代基。该烷基取代基可以包括具有1至4个碳原子的烷基，一种卤素原子等。R表示的烷基可以包括具有1-6个碳原子的烷基，如：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、戊基、己基等。R最好是低级烷基，如：甲基、乙基等，特别优选甲基。

(II)式中R²表示的低烷基优选包括具有1至4个碳原子的烷基，如：甲基、乙基、丙基、正—丁基等，更优选甲基。式(II)的胺化合物，优选其中R²是氢原子的胺化合物。

本发明中，作为初始材料的外消旋反式-3-(4-低级烷氧基苯基)-缩水甘油酸酯化合物(I)，不仅可以使用含有等量的(2R，3S)异构体和(2S，3R)异构体的化合物，也可使用含有任意比例的这两种光学活性异构体的化合物。

作为本发明方法中使用的酶，可使用那些来自微生物沙雷氏菌属(genus Serratia)，如：粘质沙雷氏菌(Serrtia marcescens)产生的具有对(2S，3R)-3-(4-低级烷基苯基)-缩水甘油酸酯不对称酰胺化作用的能力的酶，例如脂肪酶、酯酶等。属于沙雷氏菌属的这些微生物可以是野生菌或变异菌，也可以是生物工程得到的菌，例如，基因重组和细胞融合得到的菌。

微生物在培养液中产生的酶，经过分离纯化，一般可被使用。也可使用这些微生物的培养液，微生物细胞，细胞抽提物，超声波处理过的细胞等来代替这些分离的酶。