[发明专利]寡核苷酸的溶液相合成

权利要求书

1.制备硫代磷酸三酯的方法，所述方法包括：在偶联剂存在下，使H-膦酸酯与醇进行溶液相偶联，由此形成H-膦酸二酯，并且使所述H-膦酸二酯与硫转移剂现场反应，产生硫代磷酸三酯。

2.按照权利要求1的方法，其中所述H-膦酸酯为包含3’-H-膦酸酯官能的受保护的核苷或寡核苷酸。

3.按照或者权利要求1或者权利要求2的方法，其中所述醇为包含游离5’-羟基官能的受保护的核苷或寡核苷酸。

4.按照任一前述权利要求的方法，其中所述偶联剂为式(ArO)₂POCl的氯化磷酸二芳基酯，其中Ar代表苯基、2-氯苯基、2，4，6-三氯苯基或2，4，6-三溴苯基。

5.按照任一前述权利要求的方法，其中所述硫转移剂具有以下化学通式：

                  L-------S-------A其中L代表离去基团，而A代表芳基、甲基或取代的烷基或链烯基。

6.按照权利要求5的方法，其中所述离去基团为吗啉-3，5-二酮、苯邻二甲酰亚胺、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺或吲唑，而A代表4-卤代苯基、4-烷基苯基、甲基、苄基、烷基苄基、卤代苄基、烯丙基、巴豆基、2-氰基乙基或2-(4-硝基苯基)乙基。

7.按照任一前述权利要求的方法，其中所述H-膦酸酯和所述醇为核糖核苷、2-O’-(烷基、烷氧基烷基或链烯基)-核糖核苷、寡核苷酸或2-O’-(烷基、烷氧基烷基或链烯基)-寡核苷酸。

8.具有以下化学通式的H-膦酸酯：其中

每个B独立地为选自A、G、T、C或U的碱基；

每个Q独立地为H或OR’，其中R’为烷基、取代的烷基、链烯基或保护基；

每个R独立地为芳基、甲基、取代的烷基或链烯基；

W为H、保护基或下式的H-膦酸酯基团：

         其中M⁺为单价阳离子；

每个X独立地代表O或S；

每个Y独立地代表O或S；

Z为H、保护基或下式的H-膦酸酯基团：

         其中M⁺为单价阳离子；而

n为正整数；前提为：当W为H或保护基时，Z为H-膦酸酯基团，而当Z为H或保护基时，W为H-膦酸酯基团。

9.按照权利要求8的H-膦酸酯，其中W代表保护基，每个X代表O，每个Y代表S，而每个R代表甲基、苄基、2-氰基乙基、未取代的苯基或4-卤代苯基，M⁺代表三(C_1-4-烷基铵)离子，而n为1-16。

10.生产H-膦酸寡核苷酸的方法，其中在活化剂的存在下，使包含一个游离羟基官能(最好是3’或5’羟基官能)的寡核苷酸与H-膦酸烷基酯盐或芳基酯盐反应。

11.按照权利要求10的方法，其中所述寡核苷酸为受保护的寡脱氧核糖核苷酸或寡核糖核苷酸。

12.按照权利要求10或11的方法，其中所述H-膦酸酯盐为H-膦酸苯酯、烷基苯酯或卤代苯酯的铵盐。

13.按照权利要求10-12中任一项的方法，其中所述活化剂为氯化磷酸芳基酯或烷基酰基氯，最好为新戊酰基氯。