[发明专利]含有降低的4′－O－甲基吡哆素和二黄酮含量的银杏叶提取物

说明书

本发明涉及含有降低的4’-O-甲基吡哆素和二黄酮含量的银杏叶提取物、其制备方法和包含所述提取物的药物，即使在较高剂量下也不表现出由4’-O-甲基吡哆素和二黄酮引起的不良副作用。

银杏叶提取物在治疗上已经使用了30年。位于柏林的联邦卫生局E委员会(Bundesgesundheitsamt)已经确认，包含一定提取物的药物在由脑机能不全、外周闭塞性疾病、眩晕和耳鸣导致的行为障碍的对症治疗中是有效的(BAnz No．133，7月19日，1994)。这些提取物的特征在于其成分为22至27％黄酮甙、5至7％萜烯内酯、2．8至3．4％银杏苦内酯A、B和C、2．6至3．2％bilobalide、和最多5ppm的银杏酚酸(烷基酚化合物)。该银杏叶提取物及其制备方法是已知的，见DE3940091(EP-B-0431535)和DE3940092(EP-B-0431536)。

Wada等《化学与药学通报》33(1985)，3555-3557发现银杏种子中含有4’-甲氧基吡哆素(4’-O-甲基吡哆素)。在消耗大量银杏种子后，这种化合物可能导致中毒症状，如惊厥和意识丧失(“银杏食物中毒”和“银杏食品中毒”)。因此，发现这种化合物的人员将其命名为“银杏毒”。在以后的工作中，同一研究小组发现，银杏叶中不存在4’-O-甲基吡哆素(Wada等，《生物学与药学通报》16(1993)，210-212)。与此相反，最近有人报道从银杏叶中分离和鉴别到了4’-O-甲基吡哆素(Arenz等，Planta Medica，62(1996)，548-551)。在这项工作中，对含有银杏叶提取物的商品制剂中的抗维生素B6(4’-O-甲基吡哆素)成分进行了分析，发现了浓度介于4和10μg／ml液体药物之间。该浓度相当于在被加工成制剂的干提取物中100至250ppm的浓度。

治疗用银杏提取物另外包含高达1000ppm的二黄酮。我们自己所进行的研究令人惊奇地揭示，除了文献已知的生物活性以外，这些化合物还显示出免疫毒理学作用。在小鼠腘淋巴结测定中，我们观察到银杏叶的醇-水总提取物的乙酸乙酯可溶性组分引起淋巴结反应；见实施例1。对色谱分离所得的亚组分进行试验，揭示了免疫毒理学作用仅发生在给药含有超过70％二黄酮的亚组分之后。银杏中发现的二黄酮是下列化合物：sciadopitysin、银杏黄素、异银杏黄素、红杉黄酮和bilobetin。

本发明所要解决的基本技术问题是提供基本上不含4’-O-甲基吡哆素和烷基酚化合物(银杏酚酸、银杏酚)的银杏叶提取物，具有技术上可行的最小二黄酮含量，并含有公认为活性决定性成分的黄酮醇甙和萜烯内酯，浓度符合E委员会的要求(BAnz No．133，1994年7月19日)。根据本发明的提取物含有：

-20至30重量％黄酮醇甙

-总计2．5至4．5重量％银杏苦内酯A、B、C和J

-2．0至4．0重量％bilobalide

-低于10ppm、优选低于1ppm的烷基酚化合物(银杏酚酸、银杏酚)

-低于10重量％的花色素原

-低于50ppm的4’-O-甲基吡哆素

-低于100ppm的二黄酮

本发明进一步涉及这样一种银杏叶提取物的制备方法。

所解决的技术问题在于，在银杏提取物的已知制备方法中，引入了两个另外的加工步骤：

1、用阳离子交换剂处理，以除去4’-O-甲基吡哆素

2、在活性碳上吸附二黄酮

这些措施是在按照DE 3940091权利要求3中的方法中，优选在步骤g)之前或之后进行。因此，将步骤f)所得溶液过滤后，使所述溶液通过阳离子交换柱，柱子用含水乙醇或含水甲醇洗脱。所得洗脱液用活性碳处理。至于阳离子交换剂的洗脱，可以使用含有20至80重量％、优选为50重量％乙醇或甲醇的水溶液。根据本发明的这两个步骤的顺序是可互换的，所得结果不变。然后继续进行按照权利要求3下面的步骤，溶液用一种脂族溶剂或脂环族溶剂萃取，以除去烷基酚化合物。

该方法的步骤c)起到除去亲脂性组分的作用，它们是难溶于水的，包括大多数的二黄酮。

因此，根据本发明权利要求1的提取物的优选制备方法是以下列数量和顺序的步骤为特征的：

a)将银杏叶用含水丙酮、具有1至3个碳原子的含水链烷醇或无水甲醇萃取，

b)将溶剂浓缩至含量不超过10重量％，以分离有机溶剂，其中在最后的蒸馏步骤中可以加入水，