[发明专利]角质形成细胞生长因子－2制剂

说明书

发明背景

发明领域

本发明涉及角质形成细胞生长因子-2(KGF-2)及其衍生物的液体和冻干制剂。本发明进一步涉及KGF-2制剂，尤其是局部和注射用制剂，它们能用于对需要软组织生长和再生的适应症的治疗用途。

相关技术

成纤维细胞生长因子家族是参与软组织生长和再生的生长因子大家族。目前包括几个成员，它们在蛋白质水平上具有不同程度的同源性，除一个例外之外，似乎具有相似的较广的促有丝分裂谱，即，它们促进中胚层和神经外胚层来源的多种细胞的增殖，和/或促进血管发生。

KGF最初根据序列同源性或因子纯化和克隆被确定为FGF家族的一员。角质形成细胞生长因子(KGF)作为有丝分裂原从培养的鼠角质形成细胞系中分离(Rubin，J.S.等人，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)86：802-806(1989))。不同于FGF家族的其它成员，它对间充质衍生的细胞没有活性，但刺激上皮细胞的生长。角质形成细胞生长因子是由来源于皮肤和胎肺的成纤维细胞产生的(Rubin等人(1989))。发现角质形成细胞生长因子mRNA在成人肾、结肠和髂骨中表达，但不在脑或肺中表达(Finch，P.W.等人，科学(Science)245：752-755(1989))。KGF显示FGF蛋白质家族内的保守区。KGF可与FGF-2受体高亲和力地结合。

损害性创伤愈合是发病的一个重要来源，可导致如破裂、吻合破裂和非愈合性创伤等并发症。在正常个体中，可以无并发症地实现创伤愈合。相反，损伤愈合与几种病症如糖尿病、感染、免疫抑制、肥胖症和营养不良有关(Cruse，P.J.和Foord，R.，外科文献(Arch.Surg.)107：206(1973)；Schrock，T.R.等人，外科纪事(Ann.Surg.)177：513(1973)；Poole，G.U.，Jr.，外科学(Surgery)97：631(1985)；Irvin，G.L.等人，美国外科学(Am.Surg.)51：418(1985))。

创伤修复是复杂相互作用和生物过程的结果。在正常创伤愈合中描述了三个阶段：急性炎症期、胞外基质和胶原蛋白合成，以及重塑(Peacock，E.E.，Jr.，《创伤修复》(Wound Repair)，第二版，WB Saunders，Philadelphia(1984))。过程包括角质形成细胞、成纤维细胞和炎症细胞在创伤部位的相互作用。

将能促进并增强软组织生长和再生的多肽配制于药物组合物中是希望的，该组合物(1)在长期的储存期中稳定，(2)提高了多肽的药理学活性或效力，并且/或者(3)允许治疗方案中多肽的方便应用或施用。

发明概述

本发明涉及KGF-2及其缺失或点突变或置换突变体(在此称为KGF-2多肽)的液体和冻干制剂。本发明进一步涉及这些KGF-2多肽制剂促进或加速软组织生长或再生的应用，例如用于创伤愈合或治疗粘膜炎(mucocytis)或炎症性肠病。本发明的优选制剂使用KGF-2的新突变体形式，在一个实施方案中使用一种在此被称为KGF2-Δ33的缺失突变体。制剂中使用的辅助成分(1)为KGF-2多肽提供贮存稳定性，(2)进一步增强治疗组合物的软组织愈合活性，并且/或者(3)以活性形式提供KGF-2多肽，而允许用于特殊治疗目的的方便应用或施用。

本发明的第一方面涉及一种含有KGF-2多肽和具有约pH5.0-约pH8.0缓冲容量的缓冲剂的制剂。有用的缓冲剂包括磷酸盐、乙酸盐、乌头酸盐、琥珀酸盐、苹果酸盐、碳酸盐和柠檬酸盐缓冲剂，柠檬酸盐缓冲剂是优选的。

本发明的第二方面涉及一种含有KGF-2多肽、冻干填充剂和具有约pH5.0-约pH8.0缓冲容量的缓冲剂的制剂。有用的缓冲剂包括磷酸盐、乌头酸盐、琥珀酸盐、苹果酸盐、碳酸盐和柠檬酸盐缓冲剂，柠檬酸盐缓冲剂是优选的。

本发明的第三方面涉及一种含有KGF-2多肽和一种能稳定KGF-2多肽的含硫醇化合物、优选为单硫代甘油的制剂。该制剂优选地包含一种具有约pH5.0-约pH8.0缓冲容量的缓冲剂。该制剂也可包含一种或多种抗氧化剂和/或一种或多种金属螯合剂。

本发明的第四方面涉及一种含有KGF-2多肽、缓冲液和在预定温度下使制剂形成胶体的高分子量化合物的制剂。一种优选的高分子量化合物是普流罗尼(Pluronic)或泊洛沙姆(Poloxamer)聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。含硫醇化合物如单硫代甘油也能包含于该制剂中为多肽提供更强的稳定性。