[发明专利]一种用于鉴定分支杆菌种类的方法

说明书

本发明涉及一种用于鉴定造成人或动物分支杆菌感染的分支杆菌种类的方法，以及用于上述方法的诊断试剂盒。

分支杆菌属(Mycobacterium)含有50个种。它是许多种统称为分支杆菌病的疾病的起因。这些疾病中最有名的、传播最为广泛的是由麻风分支杆菌引起的麻风病，以及由结核分支杆菌引起的肺结核。这两种疾病感染了全世界一千万以上的人。大多数其它的分支杆菌正常仅以环境腐生物的形式存在。然而，它们也可能会引起机会性疾病，这些疾病经常(但不单独)发生于免疫系统有问题的生物体中，如爱滋病患者或免疫抑制患者。机会性类型包括生长缓慢的种类鸟型结核分支杆菌(M.Avium)，以及紧密相关的胞内分支杆菌(M.Intracellulare)和瘰疠分支杆菌(M.Scrofulaceum)(经常被一起称为MAIS复合物)、堪萨斯分支杆菌(M.Kansai)、海鱼分支杆茵(M.Marinum)以及溃疡分支杆菌(M.Ulcerans)、以及生长快速的种类龟分支杆菌(M.Chelonae)和偶发分支杆菌(M.Fortuitum)。虽然机会性分支杆菌疾病和肺结核这几十年来在西方世界中相当罕见，但是它们随着爱滋病的发生正在显著增加。另外，已有报道指出分支杆菌或分支杆菌的抗原在许多其它疾病，如肉状瘤病及节段性肠炎，以及其它的自身免疫性疾病，如自身免疫皮炎、风湿性关节炎以及糖尿病，的病理学中发挥着作用。有建议认为这种作用可被归于分支杆菌和宿主生物体之间抗原决定簇结构上的模仿。

分支杆菌的细胞壁非常复杂，含有许多不同的脂质，这些脂质中有一些的结构是这个种属所特有的。这些结构含有分支杆菌核透明质酸(mycolinic acid)和酯类，肽糖酯、阿拉伯半乳聚糖以及阿拉伯甘露聚糖。分支杆菌细胞富含脂质的细胞壁使分支杆菌具有显著的着色特性，它们还使分支杆菌能够抵抗宿主生物体免疫系统的攻击。有一些种类在被巨噬细胞吞噬以后把自已包裹上一层厚厚的分泌的脂质。

许多不同的分支杆菌的成分与宿主生物体的免疫系统发生相互作用。这些组分包括蛋白和碳氢化合物抗原，它们可以由分支杆菌积极地分泌，或者也可以成为细胞壁或细胞膜的一部分。另外，它们也可以存在于细胞质，如细胞质基质、核糖体和酶中。分支杆菌进而含有免疫调控成分，如免疫抑制化合物及佐剂。重要的是，一种单一的分支杆菌可以诱导许多不同的免疫反应，这些反应形式不同，有不同的特性。这使得很难获得适合用于检测种属特异性体液反应的蛋白抗原，这种检测是对上述疾病，特别是肺结核，进行高度敏感和特异的诊断试验的基础。因为分支杆菌频繁出现，所以人和动物体液几乎任何时候都含有抗分支杆菌抗体。

在过去，研究者已经尝试发展一种足够敏感的分支杆菌病诊断试验。这些尝试的焦点主要都集中在发现用于检测特异性体液免疫反应的种属特异性的糖脂抗体，因为蛋白抗原的特异性存在问题。

在国际专利申请94/14069中，公开了利用一种生物体对占免疫优势的分支杆菌交联反应抗原成分(进而被称为IMCRAC)的抗体反应来发展一种分支杆菌感染的诊断试验。IMCRAC被认为可以提供关于对具体的分支杆菌病原体的免疫识别及免疫反应的本性的间接信息。

在WO-A-94/14069中所提议的方法是基于这样一个发现，即：分支杆菌的临床表现是与宿主个体对不同的分支杆菌的具免疫交联反应活性的抗原成分(ImCRAC)产生体液反应的不同能力相联系的。每一种分支杆菌感染产生它自己对许多种指定的抗原的特异性抗体反应。对抗体反应进行分析，如通过免疫印迹法，表明具免疫优势的IM-CRAC因分支杆菌疾病的免疫病理表现而异。上述的分析在感染了不同种类分支杆菌的不同个体中获得不同的、有区别的分支杆菌抗原的条带样式。在免疫印迹后所获得的这些条带样式可以被称为抗原条形码。在条形码中所显示的抗原抗体反应，当被一起考虑时，是一种特定的分支杆菌所特有的。

本发明的目标是提供一种在诊断试验中用于鉴定分支杆菌种类的改进的方法。虽然在WO-A-94/14069中所描述的方法在大多数方面是令人满意的，但是一种比其更敏感的诊断试验仍然是合乎需求的。另外，需要一种能够用于对早先的疫苗接种进行确定，以及对感染了分支杆菌种类的生物体的治疗进行监控的诊断试验。在治疗中，有时候会出现低水平的特定的抗体，它们可能会扰乱利用抗体抗原交联反应的试验的准确度和/或敏感度，如上面所略述的。

现在已经发现，通过让一种体液样品同时与抗原和抗体接触可以进行高敏感度的诊断试验。已经发现，除了抗体之外，在动物和人的体液中还存在着几种分支杆菌成分，这些成分的存在可以通过使用交联反应，用选定的一套抗体可靠地进行确定。