[发明专利]直接快速分析微生物所含生化成分的方法与其组成无效
申请号: | 99103137.7 | 申请日: | 1999-03-23 |
公开(公告)号: | CN1243955A | 公开(公告)日: | 2000-02-09 |
发明(设计)人: | 韩晓亮;王万恒 | 申请(专利权)人: | 韩晓亮;王万恒 |
主分类号: | G01N33/50 | 分类号: | G01N33/50 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 100080 北京市海*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 直接 快速 分析 微生物 生化 成分 方法 与其 组成 | ||
1.一种用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:本方法不需要将核酸分子预先与其它细胞成分分离,该方法包涵下述内容和步骤:
(a)将上述微生物悬浮于第一溶液中,致使上述微生物溶解并释放上述核分子,形成第一悬浮液;
(b)将上述第一悬浮液在至少65℃左右加热至少10秒钟左右,该步骤并非必须;
(c)将上述第一悬浮液和第二溶液合并形成第二悬浮液,第二溶液中含有限制性核酸内切酶,用于消化上述核酸分子;
(d)检测第二悬浮液中的核酸分子。
2.根据权利要求1所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:第一溶液含有约0.1%(体积/体积)到约5%(体积/体积)的非离子去污剂。
3.根据权利要求2所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的非离子去污剂由Triton X-100,Tween-20和NP-40当中所选取。
4.根据权利要求2所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的非离子去污剂是Triton X-100。
5.根据权利要求1所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的第一溶液是水。
6.根据权利要求1所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的微生物选于细菌,真菌,真核细胞和噬菌体。
7.根据权利要求1所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的微生物是细菌。
8.根据权利要求1所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:用凝胶电泳的方法来实行(d)步骤的检测。
9.根据权利要求8所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的凝胶电脉能够辨别所述核酸分子量的大小。
10.根据权利要求1所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的核酸分子几乎完全被所述的限制性核酸内切酶所消化。
11.根据权利要求1所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的第1溶液中不含SDS或EDTA。
12.根据权利要求1所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的核酸分子不是微生物的内源性核酸分子。
13.根据权利要求1所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:没有用多聚酶链反应的方法来扩增核酸分子的步骤。
14.根据权利要求1所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的第一溶液含有Tris-HCl。
15.一种用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:本方法不需要将核酸分子预先与其它细胞成份分离,该方法包涵下述内容的步骤:
(a)将所述的微生物悬浮于含有限制性核酸内切酶的溶液中,该溶液能裂解所述的微生物并从该微生物中释出核酸分子,所述的限制性核酸内切酶消化所释出的核酸分子,所述的悬浮步骤产生出了悬浮液;
(b)在该悬浮液中检测所述的核酸分子。
16.根据权利要求15所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的溶液中含有0.1%(体积/体积)到5%(体积/体积)的非离子去污剂。
17.一种用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:本方法不需要将生物化学组分预先与其它的细胞成份分离,该方法包涵下述内容的步骤:
(a)将所述的微生物悬浮于第一溶液中形成第一悬浮液,在第1溶液中含有有效阻止DNA酶活性的组份;
(b)将第一悬浮液和第二溶液合并形成第二悬浮液,第二溶液中含有碱性缓冲液和去污剂,所述的生物化学组份由所述的微生物中释出;
(c)检测第二悬浮液中的生物化学组份。
18.根据权利要求17所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的生物化学组份是核酸分子。
19.根据权利要求18所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述的核酸分子是DNA。
20.根据权利要求17所述的用于检测微生物中核酸分子的方法,其特征是:所述能有效阻止DNA酶活性的组份是EDTA。
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