[发明专利]吡啶正离子型多肽缩合剂、合成及其应用

说明书

本发明涉及一类多肽缩合剂，即吡啶正离子型多肽缩合剂、合成及其应用。

随着多肽以及蛋白质化学的发展，人们设计、合成了多种类型的缩合剂以满足多肽以及蛋白质合成的要求。例如1955年由Sheehan和Hess首先提出的缩合剂二环己基碳二亚胺DCC就很有代表性，至今仍被广泛使用。但DCC作缩合剂用于多肽合成会产生很多副反应，如反应过程中会形成N-酰基脲副产物，发生消旋。如D.R.Detar，R.Silverstein，F.F.Rogers，J.Am.Chem.Soc.，1966，88，1024.和D.R.Detar，R.Silverstein，J.Am.Chem.Soc.，1966，88，1020.中报道的DCC活化Asn和Gln时，还能引起ω-酰胺基脱水形成氰基的副反应。DCC法的另一个缺点是反应生成的N，N’-二环己基脲DCU在大多数有机溶剂中溶解度很小，有时会混在产物中而很难除尽。为此人们在DCCI的结构上进行了改进，发展了一些水溶性的碳二亚胺，如N-cyclohexyl-N’-(4-diethylaminocyclohexyl)-carbodiimide，N-cyclohexyl-N’-[2-(4-methyl morpholini)-ethyl]carbodiimide tosylate和N-ethyl-N’-(3-dimethyl aminopropyl)-carbodiimide来代替DCC，但都未得到广泛的应用。

自1975年，Castro等人设计、合成了第一个基于HOBt的磷正离子型缩合剂BOP以来，以1-羟基苯并三唑HOBt为活化酯的磷正离子型和碳正离子型试剂迅速发展，如Coste，J.，Le-Nguyen，D.AndCastro，B.，Tetrahedron Lett.，1990，31，205等文献中报道了PyBOP，HBTU，HBPyU，HBPipU，HBMDU，HBMTU等以HOBt为活化酯的缩合剂。但在这类试剂中，除BOP和HBTU在合成中已被应用外，其余的试剂都未被普遍使用。而BOP和HBTU也存在一些缺点，如在文献Rowell，R.M.，Appl.Biochem.Biotechnol，1984，9，447；Oustrin，M.L.，Moisand，C.，Cros，M.L.and Bonnefoux，J.，Ann.Pharm.Fr.，1972，30，685；Moisand，A.，Moisand，C.and Pitet，G.，Ann.Pharm.Fr.，1970，28，575中指出在制备和使用BOP时，会遇到有致癌毒性的六甲基磷酰三胺。HBTU也有同样的问题，在制备和使用过程中，遇到的四甲基脲素也是具有细胞毒的物质。产生消旋也是这类试剂的一个缺点。在young’s test中，Chen，S.Q.andXu，J.C.，Tetrahedron Lett.，1992，33，647-650用BOP试剂发现有39.8％的消旋产物，而HBTU试剂也有25.4％的消旋产物。Galpin，I.J.，Gordon，P.F.，Ramage，R.and Thorpe，W.D.，Tetrahedron，1976，32，2417中Galpin等人报道在用BOP缩合Z-Gly-Ala-OH和H-Leu-OCH2Ph的过程中有29％的消旋，Steinauer，R.，Chen，F.M.F.and Benoiton，N.L.，Int.J.Peptide Protein Res.，1989，34，295中Steinauer等人认为BOP试剂由于本身的消旋程度而导致在肽的片段缩合中不适合性。