[发明专利]冻干甲型肝炎减毒活疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及病毒性疫苗的医用生物制品，具体涉及一种甲型肝炎减毒活疫苗及其制备方法。

甲型肝炎(甲肝)是一种极易传染和流行的疾病，一旦传播很易造成大流行。此病主要发生在发展中国家，在一些发达国家的发病人数也较多。我国35岁以上的成年人，甲肝抗体阳性率达90％以上，常引起季节性的流行。近年来，随着经济的发展，居住的小环境有所改善，但大环境中引起甲肝的甲型肝炎病毒的污染及散布条件却依然存在且更为严重，单纯靠改善卫生条件难以预防解决甲肝严重流行的问题。因此，发展安全有效的甲肝疫苗是目前预防甲肝的主要措施。

自1973年，Feinstone等发现肝炎病毒(Hepatitis A Virus)是传染性肝炎的的病原体，1979年Provost在体外分离培养肝炎病毒，获得了甲肝病毒株后，为甲肝疫苗的研制开辟了道路。目前，世界上有两类甲型肝炎疫苗，即甲型肝炎减毒活疫苗和甲型肝炎灭活疫苗，国外主要发展灭活疫苗，而活疫苗仅有中国、美国等少数国家在研究和生产。这两种疫苗各有优缺，减毒活疫苗的缺点是稳定性差，有效的保存期限短，必须在冷冻条件下保存和运输，优点是价格便宜，免疫原性好，有细胞免疫功能。灭活疫苗的优点是免疫原性很强，免疫后体液抗体很高，疫苗稳定，保存期较长，缺点是细胞免疫功能不如减毒活疫苗，且价格昂贵。我国于1978年开始研究甲肝减毒活疫苗，“七五”期间被列为国家重大科技攻关计划项目，由浙江省医学科学院、中国医学科学院生物学研究所以及中国药品生物制品检定所合作，选育出了二株(H₂株和LA-1株)，并在“八五”、“九五”期间继续进行了大量研究和临床试验，结果表明，国产的两种甲肝减毒活疫苗安全可靠、免疫性良好，其免疫效果与国外灭活疫苗相同。

但从现在国产的两种甲型肝炎减毒活疫苗看，均为液体剂型，其热稳定性较差，不同滴度的疫苗从实验检定到现场注射，感染性滴度都有不同程度的下降，平均下降0.5logCCID50/ml左右，减度活疫苗在2-8℃条件下仅能有效保存三个月，-20℃保存期限仅1年。因此，使产品的推广和应用受到很大限制。查新检索结果表明，近年来仅见日本有甲型肝炎灭活疫苗的冷冻干燥剂型的研究及商品，未见有冻干甲型肝炎减毒活疫苗的研究报道。

本发明的目的在于提供一种热稳定性好，便于运输和保存的冻干甲型肝炎减毒活疫苗及其制备方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明包括液体甲型肝炎减毒活性疫苗和冻干保护剂，冻干保护剂配方如下(W/V)：海藻糖1～15克，氨基酸0.1～5克，明胶0.1～1克，人白蛋白0.1～1克，氯化钠0.145克，氯化钾0.185克，磷酸氢钠0.895克，磷酸二氢钾0.34克，双蒸馏水100毫升，其中的氨基酸可为甘氨酸和/或精氨酸和/或赖氨酸。

本发明的制备方法包括以下步骤：

1、配制冻干保护剂

将海藻糖1～15克，氨基酸0.1～5克，明胶0.1～1克，人白蛋白0.1～1克，氯化钠0.145克，氯化钾0.185克，磷酸氢钠0.895克和磷酸二氢钾0.34克加入到100毫升双蒸馏水中，其中氨基酸可为甘氨酸和/或精氨酸和/或赖氨酸；

2、取现有的液体甲型肝炎减毒活疫苗与上述保护剂按体积比为1∶1的比例混合均匀后待用；

3、在压力为15磅、温度为112℃-115.6℃的条件下灭菌30分钟后，在37℃的条件下培养7天备用；

4、将冻干箱内温度预先降至-4℃，将分装好的疫苗与保护剂的混合液放入冻干箱内，以0.37℃/分钟的速度降温度至-30℃，维持2小时后，抽真空至8×10^-3托时，以0.3℃/分钟的速度将温度升至-4℃后，维持14小时，在此期间每隔1小时抽真空1次至0托，并检测水份含量，当残余水份≤3％时，升温至20℃，升温速度为0.24℃/分钟，并维持7-9小时后，塞上瓶塞，出箱即可，整个冻干过程为25-48小时。

下面对本发明的试验条件及方法等技术细节作详细描述：

1、生产疫苗用毒种及毒种继代