[发明专利]GFP－TNF－α融合蛋白原核表达系统构建及产物和应用

权利要求书

1.在原核表达载体pRSET中插入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因与人分泌型肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因构建成的重组的pRSET-GFP-TNF表达质粒。

2.根据权利要求1所述的重组载体，其特征在于它的构建方法是：

①用EcorR I和Hind III双酶消化含GFP基因的质粒(pS95A)，回收约700bpGFP cDNA片段；用与上述相同的双酶消化原核表达载体pRSET，并将GFP cDNA片段插入该载体中，构成pRSET-GFP重组体；

②用BamH I和hind III双酶消化含TNF基因的pBSK-17KDTNF质粒，回收约近500bpTNF cDNA片段，插入用相同酶切的pRSET-GFP质粒，构建成pRSET-GFP-TNF重组体；

3.根据权利要求1或2所述的重组基因表达载体，其特征在于其所含有的绿色荧光蛋白(GFP)基因与人分泌型肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因融合体具有如下碱基序列：ATG AGC ACT GAA AGC ATG ATC CGG GAC GTG GAG CTG GCC GAG GAG GCGCTC CCC AAG AAG ACA GGG GGG CCC CAG GGC TCC AGG CGG TGC TTG TTC CTCAGC CTC TTC TCC TTC CTG ATC GTG GCA GGC GCC ACC ACG CTC TTC TGC CTGCTG CAC TTT GGA GTG ATC GGC CCC CAG AGG GAA GAG TTC CCC AGG GAC CTCTCT CTA ATC AGC CCT CTG GCC CAG GCA GTC AGA TCA TCT TCT CGA ACC CCGAGT GAC AAG CCT GTA GCC CAT GTT GTA GCA AAC CCT CAA GCT GAG GGG CAGCTC CAG TGG CTG AAC CGC CGG GCC AAT GCC CTC CTG GCC AAT GGC GTG GAGCTG AGA GAT AAC CAG CTG GTG GTG CCA TCA GAG GGC CTG TAC CTC ATC TACTCC CAG GTC CTC TTC AAG GGC CAA GGC TGC CCC TCC ACC CAT GTG CTC CTCACC CAC ACC ATC AGC CGC ATC GCC GTC TCC TAC CAG ACC AAG GTC AAC CTCCTC TCT GCC ATG AAG AGC CCC TGC CAG AGG GAG ACC CCA GAG GGG GCTGAG GCC AAG CCC TGG TAT GAG CCC ATC TAT CTG GGA GGG GTC TTC CAG CTGGAG AAG GGT GAC CGA CTC AGC GCT GAG ATC AAT CGG CCC GAC TAT CTC GACTTT GCC GAG TCT GGG CAG GTC TAC TTT GGG ATC ATT GCC CTG AGT AAA GGAGAA GAA CTT TTC ACT GGA GTT GTC CCA ATT CTT GTT GAA TTA GAT GGT GATGTT AAT GGG CAC AAA TTT TCT GTC AGT GGA GAG GGT GAA GGT GAT GCA ACATAC GGA AAA CTT ACC CTT AAA TTT ATT TGC ACT ACT GGA AAA CTA CCT GTTCCA TGG CCA ACA CTT GTC ACT ACT TTC ACT TAT GCT GTT CAA TGC TTT TCAAGA TAC CCA GAT CAT ATG AAA CAG CAT GAC TTT TTC AAG AGT GCC ATG CCCGAA GGT TAT GTA CAG GAA AAA ACT ATA TTT TTC AAA GAT GAC GGG AAC TACAAG ACA CGT GCT GAA GTC AAG TTT GAA GGT GAT ACC CTT GTT AAT AGA ATCGAG TTA AAA GGT ATT GAT TTT AAA GAA GAT GGA AAC ATT CTT GGA CAC AAATTG GAA TAC AAC TAT AAC TCA CAC AAT GTA TAC ATC ATG GCA GAC AAA CAAAAG AAT GGA ATC AAA GTT AAC TTC AAA ATT AGA CAC AAC ATT GAA GATGGA AGC GTT CAA CTA GCA GAC CAT TAT CAA CAA AAT ACT CCA ATT GGC GATGGC CCT GTC CTT TTA CCA GAC AAC CAT TAC CTG TCC ACA CAA TCT GCC CTTTCG AAA GAT CCC AAC GAA AAG AGA GAC CAC ATG GTC CTT CTT GAG TTT GTAACA GCT GCT GGG ATT ACA CAT GGC ATG GAT GAA CTA TAC AAA TAA