[发明专利]甘薯中粘液蛋白的提取纯化方法

说明书

本方法介绍一种甘薯中粘液蛋白的提取纯化方法。

据《本草纲目》记载，甘薯性味甘平无毒，健脾胃，补虚弱，使人长寿少病。甘薯是一种生理碱性食品(含碱度高达10.3％)，起着维持健康人体的血液弱碱性作用。日本国立癌症预防研究所通过对40多种蔬菜实验性抑癌试验，发现抑制肿瘤效应最好的为甘薯，抑癌效应达90％以上。我们通过SOS显色试验和Ames试验发现甘薯中的粘液蛋白具有显著的抗突变作用，并且对一月龄昆明种小白鼠的特异性细胞免疫(迟发型过敏反应)，非特异性免疫(巨噬细胞吞噬功能)，体液免疫(溶血素含量、对胸腺的增重)都有显著的增强作用，表明甘薯粘液蛋白能有效地增强机体的免疫调节功能，还发现甘薯粘液蛋白具有明显的降血脂作用。正因为如此，近年来日本和欧美一些国家纷纷将甘薯作为营养佳品甚至作为药物来食用，掀起了一场吃甘薯的热潮。但有关甘薯粘液蛋白的分离提取方法及其保健作用研究至今国内外还未见报道。

本发明的目的是提供一种甘薯中粘液蛋白的提取纯化方法，这种方法在提取时不影响甘薯淀粉制品的加工。将制备纯化好了的甘薯粘液蛋白作为保健食品的功能因子，与其它食物原料进行科学配方，合理加工成各种各样的保健食品，或者将其制成象“丙种球蛋白”那样的免疫药物针剂。

本发明提供的甘薯中粘液蛋白的提取纯化方法如下：

一、甘薯粘液蛋白的提取

选用无腐烂的甘薯(鲜或干甘薯均可)，去泥沙后用筛孔直径为1.0～2.0mm的粉碎机粉碎后，用甘薯重4～6倍的水在40～60℃下浸提3次，合并浸提液，浸提残渣可制甘薯淀粉。浸提液在2000rpm下离心15mmin，上清液真空浓缩至加入95％的酒精或丙酮后静置沉淀18～20h，再在2000rpm下离心15min，收集沉淀物，上清液回收酒精或丙酮。

二、甘薯粘液蛋白的初步纯化

将“一项”得到的沉淀物用适量水(1～2倍水)溶解后，用氯仿-正丁醇(4∶1)脱游离蛋白3次，取水溶液层透析48h，透析袋的分子截留量为1000Mr。透析内液在3000rpm下离心20min，上清液进行真空干燥(真空5～10mmHg)即得甘薯粘液蛋白的粗品，纯度约为84.5％。

三、甘薯粘液蛋白的进一步纯化

将“二项”得到甘薯粘液蛋白粗品用适量去离子水(1～2倍)溶解后，上DEAE52纤维素柱层析，用0.05mol/L，0.1mol/L和0.5mol/L碳酸氢钠溶液阶段洗脱，洗脱速度为1.5ml/min，洗脱液透析48h后(透析袋分子截留量为1000Mr)，真空浓缩至再上Sephadex G100层析柱，This-HCl(pH7.2)洗脱，洗脱速度为0.6ml/min，洗脱液透析48h后(透析袋分子截留量为1000Mr)，真空干燥(真空度5～10mmHg)，即得甘薯粘液蛋白纯品，纯度约为99.2％。

四、包装

将“二项”得到的甘薯粘液蛋白粗品和“三项”得到的甘薯粘液蛋白纯品装袋或装瓶或装罐，密封后入库保存，要求包装袋或玻瓶透光性极差为宜。

由于该方法制备的甘薯粘液蛋白纯度高，方法简便，重复性也好，并且又不影响甘薯淀粉的加工，因此是一种具有广阔应用前景的甘薯深加工方法。

图1为本发明的工艺流程图。

本发明的实施例如下：

取北京2号鲜甘薯5kg，去泥沙后用筛孔直径为1.0～2.0mm的粉碎机粉碎后，用25kg水在50℃下浸提3次，合并浸提液在2000rpm下离心15min，上清液真空浓缩至2kg，加95％的酒精后静置沉淀20h，再在2000rpm下离心15min收集沉淀物并称重，上清液回收酒精。将沉淀物用0.3kg水溶解，用氯仿-正丁醇(4∶1)脱游离蛋白3次，取水液层透析48h，透析内液在3000rpm下离心20min，上清液进行真空干燥(真空度5～10mmHg)即得到纯度约为84.5％的甘薯粘液蛋白粗品(淡黄色粉末)约23.5g，得率约为0.47％。如将该甘薯粘液蛋白粗品用0.04kg去离子水溶解后，上DEAE52纤维素柱层析，用0.05mol/L、0.1mol/L和0.5mol/L碳酸氢钠溶液阶段洗脱，洗脱速度为1.5ml/min，透析后真空浓缩至0.04kg，再上Sephadex G100层析柱，用pH7.2的Tris-HCl洗脱，洗脱速度为0.6ml/min，透析后真空干燥(真空度5～10mmHg)即可得纯度约为99．2％的甘薯粘液蛋白纯品(白色粉末)约10.16g，得率约为0.20％。