[发明专利]一种培养葛仙米的方法

权利要求书

1、一种培养葛仙米的方法，其特征是：

A、培养液制配；将配制好的贮藏液加入水中的顺序是，硫酸镁、氯化钙、柠檬酸、柠檬酸铁铵、乙二酸四乙酸二钠盐、碳酸钠、土壤浸出液、微量元素A5、磷酸氢二钾按比例配制；

B、藻种制备：首先将葛仙米球形体用乙醇溶液快速洗涤，其次是将藻种无菌纯化，第三是藻殖段制种，第四是扩大制种；

C、制备接种物；

D、培养；

E、实时监控；

F、筛选收获；

J、提高筛上球形体的机械强度；

H、干燥。

2、根据权利要求1所述的一种培养葛仙米的方法，其特征是培养液制配：

硫酸镁              0．07-0．08g；

氯化钙              0．03-0．042g；

柠檬酸              0．005-0．007g；

柠檬酸铁铵          0．005-0．007g；

乙二酸四乙醇二钠盐  0．001-0．002g；

碳酸钠              0．03-0．05g；

土壤浸出液          2．5-3．5ml；

微量元素A5        1ml；

磷酸氢二钾          0．07-0．09g。

3、根据权利要求1所述的一种培养葛仙米的方法，其特征是藻种制备：首先将葛仙米球形体用70％乙醇溶液洗涤，在灭过菌的培养液中洗涤，将球形体放在玻璃匀浆器中，加入无菌培养液，再将球形体的匀浆液涂布在琼脂平板上，用封口膜将培养皿封好，置于26℃光照培养箱培养；其次是藻种无菌纯化，将球形体匀浆破碎，按入含有0．5％蔗糖，100ug／L氨苄青霉素，0．1％酵母提取物的培养液中，置黑暗条件下，在30-35℃培养24小时，离心，无菌培养液洗涤，获得球形体；第三是藻殖段制种，将分离的藻种接种于培养液，在玻璃培养器中通气培养，收集球形体用无菌蒸馏水洗涤，置于光照培养箱，在25-30℃，5-10μE．m^-2．s^-1光强下诱导2-3天，将藻殖段转入培养液中静止或通气培养，制备藻种；第四是扩大制种，将球形体匀浆，接入培养液，通气培养，制备藻种。

4、根据权利要求1所述的一种培养葛仙米的方法，其特征是制备接种物，将球形体逐级培养，首先原种制备；其次是将原种破碎物或藻殖段接入培养液，在玻璃培养器中以1-10L／分钟通气培养，并施以光照，强度在10-800μE．m^-2．s^-1之间，10-30天后收集小球形体，无菌培养液洗涤，获得一级培养物；第三是将一级培养物按第二步再培养一次，10-30天后，球形体长大到直径1mm，为二级培养物，洗涤后的二级培养物作为培养的接种物。

5、根据权利要求1所述的一种培养葛仙米的方法，其特征是提高筛上球形体的机械强度，在培养液中加入1．5g／L的Na₂CO₃，将球形体转移到含有Na₂CO₃的培养液中，以培养时的同样条件通气培养3-5天收获或将球形体静置于原培养液中，于低温下(1-10℃)静置10-15天。