[发明专利]减毒型牛病毒性腹泻病毒

权利要求书

1.一种减毒型牛病毒性腹泻(BVD)病毒，其中该病毒基因组核酸序列包括SEQ ID NO：1中自第39至12116核苷酸之间的序列，或其简并性变异体。

2.权利要求1的减毒BVD病毒，其中该病毒基因组核酸序列基本上由SEQ 1D NO：1中自第39至12116核苷酸之间的序列或其简并性变异体组成。

3.权利要求1的病毒，其为基本上纯的形式。

4.一种用权利要求1的病毒感染的宿主细胞。

5.权利要求4的宿主细胞产生的子代病毒。

6.一种包括权利要求1的减毒BVD病毒和兽医可接受的载体的疫苗。

7.一种核酸分子，包括SEQ ID NO：1中自第39至12116核苷酸之间的序列，或其简并性变异体。

8.权利要求7的核酸分子，其基本上由SEQ ID NO：1中自第39至12116核苷酸之间的序列或其简并性变异体组成。

9.权利要求7的核酸分子，其为基本上纯的形式。

10.一种包含一个基本上由权利要求7的核酸分子组成的独立密码元件的载体。

11.权利要求10的载体，即p BVDdN1质粒(ATCC No.203354)。

12.一种用权利要求7的核酸分子或权利要求10中的载体转化或转染的宿主细胞。

13.用权利要求12的宿主细胞产生的子代BVD病毒。

14.一种包含权利要求7的核酸分子及兽医可接受的载体的疫苗。

15.一种修饰已分离的野生型BVD病毒基因组以使之适用作疫苗的方法，包括使所述已分离的野生型BVD病毒基因组核酸突变导致N^pro蛋白酶基因失活。

16.权利要求15的方法，其中使所述N^pro蛋白酶基因失活是用下列方法实现的，包括：

a)将该野生型BVD病毒基因组RNA逆转录成cDNA；

b)克隆a)步骤中的cDNA；

c)使b)步骤中克隆的cDNA中的N^pro蛋白酶基因突变，从而该基因无法产生具有完全活性的基因产物；并且

d)克隆c)步骤中突变的cDNA。

17.权利要求16的方法，其中通过删除所述野生型BVD病毒基因组的全部或部分N^pro蛋白酶基因序列使该基因失活。

18.一种用权利要求15的方法获得的BVD病毒基因组。

19.一种载体，其包括一个基本上由权利要求18的BVD病毒基因组组成的独立序列元件。

20.一种用权利要求18的病毒基因组或权利要求19的载体转染的宿主细胞。

21.用权利要求20的宿主细胞产生的子代BVD病毒。

22.一种包含权利要求18的病毒基因组和兽医可接受的载体的疫苗。

23.一种使野生型BVD病毒减毒以便适用于疫苗的方法，包括使该病毒基因组核酸突变导致N^pro蛋白酶基因失活。

24.权利要求23的方法，其中减毒通过下列方法实现，包括：

a)分离所述野生型BVD病毒；

b)克隆a)步骤中已分离病毒的基因组核酸；

c)使b)步骤中克隆的基因组核酸突变导致N^pro蛋白酶基因失活；并且

d)将c)步骤中突变的核酸转化或转染入宿主细胞以获得减毒病毒。

25.权利要求24的方法，其中通过从所述野生型BVD病毒基因组中缺失全部或部分N^pro蛋白酶基因使该基因失活。

26.一种用权利要求23的方法获得的减毒BVD病毒。

27.一种用权利要求26的减毒病毒感染的宿主细胞。