[发明专利]减毒型牛病毒性腹泻病毒

说明书

本发明涉及通过使病毒基因组中一个特定基因失活而产生减毒型牛病毒性腹泻(BVD)病毒的方法。该减毒型病毒或突变的病毒基因组可用来产生抗BVD病毒抗体或作为疫苗防止牛发生病毒感染。

牛病毒性腹泻(BVD)病毒属于瘟病毒属和黄病毒类。它与可引起绵羊border病和猪典型性发热的病毒密切相关。被感染的牛可表现出“粘膜病”，其特征有体温升高、腹泻、咳嗽及消化道粘膜产生溃疡(Olafson等人，Cornell Vet.36：205-213(1946)；Ramsey等人，北美兽医学(North Am.Vet)34：629-633(1953))。BVD病毒可穿过孕牛胎盘，导致产生持续感染的新生小牛(Malmquist美国兽医医学联合会杂志(J.Am.Vet.Med.Assoc.188：618-619(1986))。这些小牛对病毒发生免疫耐受，一生都将产生持续的病毒血症。这些小牛易爆发粘膜病(Liess等人，Dtsch.Tieraerztl.wschr.81：481-487(1974))并极易受到导致如肺类、肠炎等疾病的微生物感染(Barker等人，兽医(Vet.Rec.)117：459-464(1985))。

按照带有两种不同生物类型将BVD病毒分类。有“cp”生物类型的病毒可诱导培养细胞发生细胞病变，而“ncp”生物类型病毒不具备此效应(Gillespie等人，Cornell Vet 50：73-79(1960))。另外，已识别两种主要的基因型(I型和II型)，二者都可产生一系列临床症状(Pellerin等人，病毒学(Virology)203：260-268(1994)；Ridpath等人，病毒学，205：66-74(1994))。

BVD基因组长约12.5kb，含有一个开放阅读框架，该框架位于5’和3’非翻译区(NTR)之间(Collet等人，病毒学165：191-199(1988))。从该框架可翻译约438KD的多聚蛋白，并在细胞和病毒蛋白酶作用下将其加工成病毒的结构和非结构蛋白(Tautz等人，病毒学杂志(J.virol)71：5415-5422(1977)；Xu等人，病毒学杂志，5312-71：5322(1977)；Elber等人，病毒学杂志，70：4131-4135(1996)；和Wiskerchen等人，病毒学184：341-350(1991)。参与该加工的病毒酶系有N^pro和NS3蛋白酶。N^pro是病毒开放阅读框架编码的第一个蛋白，可将自身从其余合成的多聚蛋白中切除(Stark等人，病毒学杂志67：7088-7093(1993)；Wiskerchen等人，病毒学65：4508-4514(1991))。

现有的BVD疫苗中的病毒是用化学方法灭活的(Mcclukin等人，Arch.Virol.58：119(1978)；Fernelius等人，美国兽医研究杂志(Am.J.Vet.Res.)33：1421-1431(1972)；和Kolar等人，美国兽医学研究杂志，33：1415-1420(1972)。一般需多次剂量给予这些疫苗以产生初级免疫，所产生的免疫效应作用短暂且不能防止胎体感染(Bolin，Vet.Clin.North.Am.Food Anim.Pract.11：615-625(1995))。曾有报道在绵羊中制备出以纯化的E2蛋白为基础的亚基疫苗(Bruschke等人，疫苗(vaccine)15：1940-1945(1997))。但是，只有一种此类疫苗可保护胎体免受感染，且该保护仅仅针对一株同源病毒。抗体效价与抗病毒感染力之间没有联系。