[发明专利]一种新的基因定位方法及试剂盒

权利要求书

1．一种确定生物体在一遗传位点上的基因型的方法，其特征在于，它包括以下步骤：

比较该待确定基因型的生物的具有多态性的基因型DNA序列，确定出核苷酸存在差异的DNA序列部分定为DCT标记，并将其中任一基因型DNA序列定为标准序列，将相对标准序列而言含有核苷酸变化的另一基因型DNA序列定为变异序列；

合成核苷酸序列基本上对应于标准序列的第一对PCR引物A1和A1′，引物A1的3′端终止于该核苷酸差异处，该第一引物对A1/A1′可特异地扩增出对应于标准序列的扩增产物；

合成核苷酸序列基本上对应于变异序列的第二对PCR引物B1和B1′，引物B1的3′端终止于该核苷酸差异处，该第二引物对B1/B1′可特异地扩增出对应于变异序列的扩增产物；

在特异性PCR条件下，用第一对引物和第二对引物分别对测试样品进行PCR反应，并电泳检测扩增结果；

对扩增结果进行分析，确定被检测样品在该遗传位点上的基因型。

2．如权利要求1所述的方法，其特征在于，该核苷酸差异是一个核苷酸差异，而且引物A1完全匹配于标准序列，而引物B1完全匹配于变异序列。

3．如权利要求1所述的方法，其特征在于，引物A1′和B1′是相同的引物。

4．如权利要求1所述的方法，其特征在于，引物A1和A1′以及引物B1和B1′的长度为10-60碱基对。

5．如权利要求1所述的方法，其特征在于，PCR反应中的循环次数为20-30循环。

6．一种基因定位方法，它包括：

对两种生态型的生物体进行杂交，获得杂交后代F1；

使杂交后代F1进行自交，获得F2代；

对F2代的各生物体进行基因定位；

其特征在于，对F2代各生物体进行基因定位是采用DCT标记定位法，该方法包括以下步骤：

选出一个或多个DCT标记，即两种生态型的DNA序列中存在核苷酸差异的部分；

合成核苷酸序列基本上对应于DCT标记标准序列的第一对PCR引物A1和A1′，引物A1的3′端终止于该核苷酸差异处，该第一引物对A1/A1′可特异地扩增出对应于标准序列的扩增产物；

合成核苷酸序列基本上对应于DCT标记变异序列的第二对PCR引物B1和B1′，引物B1的3′端终止于该核苷酸差异处，该第二引物对B1/B1′可特异地扩增出对应于变异序列的扩增产物；

在特异性PCR条件下，用第一对引物和第二对引物分别对测试样品进行PCR反应，并电泳检测扩增结果；

对扩增结果进行分析，确定待定位基因是否与所用DCT标记连锁；

计算出与连锁的DCT标记的距离。

7．如权利要求6所述的方法，其特征在于，该核苷酸差异是一个核苷酸差异，而且引物A1完全匹配于标准序列，而引物B1完全匹配于变异序列。

8．如权利要求6所述的方法，其特征在于，引物A1′和B1′是相同的引物。

9．如权利要求6所述的方法，其特征在于，引物A1和A1′以及引物B1和B1′的长度为10-60碱基对。

10．如权利要求6所述的方法，其特征在于，PCR反应中的循环次数为20-30循环。

11．一种基因定位试剂盒，其特征在于，它含有：

容器；

一组或多组DCT标记的引物，每组DCT标记引物包括针对同一DCT标记的2对引物：

第一对PCR引物A1和A1′的核苷酸序列基本上对应于该DCT标记标准序列，引物A1的3′端终止于该核苷酸差异处，该第一引物对可特异地扩增出对应于标准序列的扩增产物；

第二对PCR引物B1和B1′的核苷酸序列基本上对应于该DCT标记变异序列′，引物B1的3′端终止于该核苷酸差异处，该第二引物对可特异地扩增出对应于变异序列的扩增产物；

以及使用说明。

12．如权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒还含有PCR反应所需的试剂，

且在每组引物中，引物A1完全匹配于标准序列，而引物B1完全匹配于变异序列，而且引物A1′和B1′是相同的引物。