[发明专利]新型淀粉酶

说明书

技术领域

本发明涉及具有高抗螯合剂性能并且可用作去污剂成分的碱性溶解α-淀粉酶。

发明背景

α-淀粉酶已广泛用于各种工业领域如淀粉、酿造、纤维、制药和食品工业。因为已知α-淀粉酶适合用作去污剂成分，所以它们甚至作为去污增效成分掺入到自动洗碗去污剂或洗衣去污剂中(Enzymes inDetergency，203页，Marcel Dekker Inc.，New York(1995))。

关于可用于去污剂并且在碱性范围具有最佳效应的溶解α-淀粉酶，本发明人先前发现的来源于芽孢杆菌属种类菌株KSM-1378(FERMBP-3048)的那些淀粉酶是已知的。最近，具有8-9.5附近的最佳pH的α-淀粉酶已经公开(WO95/2639)，它们在特征和结构方面与那些来自菌株KSM-1378的淀粉酶非常相似。

在去污剂中掺入螯合剂如磷酸、柠檬酸或沸石等以从洗涤液除去洗涤干扰离子如钙离子。长期以来认为溶解α-淀粉酶需要钙离子来发挥酶活性，但是钙离子会被上述螯合剂或更强的螯合剂EDTA钝化(淀粉酶和相关酶手册，43页，日本淀粉酶研究会(1988))。最近有报道，目前已知的溶解α-淀粉酶的X射线晶体分析揭示三个钙原子存在其分子中，并且13个氨基酸残基以明显高频率保守[结构，6,281(1998)]。

螯合剂对酶活性的抑制在上述来源于芽孢杆菌属种类菌株KSM-1378(FERM BP-3048)的碱性溶解α-淀粉酶中发现，而且当将α-淀粉酶掺入自动洗碗去污剂或洗衣去污剂时，这种α-淀粉酶并不总是表现足够的效应。来源于地衣芽孢杆菌的溶解α-淀粉酶(透阿米尔和Duramyl，Novo Nordisk A/S的产品)，经常用作自动洗碗去污剂或洗衣去污剂的一种成分，在抗螯合剂的性能方面也是不够的。

目前已知的溶解淀粉酶中，来自属于热球菌属种类的菌株的溶解α-淀粉酶(WO90/11352)和来自属于硫化叶菌种类的菌株并在淀粉溶解步骤中有效的α-淀粉酶(WO96/02633)不受螯合剂的影响。然而，这些酶的最佳作用pH值分别在4-6和2.5-4.5范围内，而不在碱性范围起作用，因此它们不适于作为去污剂的成分。

因此，本发明的一个目的是提供具有比用于去污剂的传统淀粉酶更高的抗螯合剂性能并且可用作去污剂成分的碱性溶解α-淀粉酶以及其中掺入了此碱性溶解α-淀粉酶的去污剂组合物。

发明公开

在本发明的一方面，提供一种碱性溶解淀粉酶，当在1-100mMEDTA或EGTA存在的情况下于pH10和45℃处理30分钟时，具有不低于70％的剩余活性。

在本发明的另一方面，提供编码所述碱性溶解淀粉酶的DNA片段。

在本发明更进一步的方面，提供含有所述碱性溶解淀粉酶的去污剂组合物。

附图简述

图1是说明EDTA处理浓度与根据本发明所述的每一种碱性溶解淀粉酶(K36和K38)和已知的用于去污剂的淀粉酶的剩余活性之间的关系的图；图2是说明EGTA处理浓度与根据本发明所述的每一种碱性溶解淀粉酶(K36和K38)和已知的用于去污剂的淀粉酶的剩余活性之间的关系的图；图3是说明沸石处理浓度与根据本发明所述的碱性溶解淀粉酶K36的剩余活性之间的关系的图；图4是说明柠檬酸处理浓度与根据本发明所述的碱性溶解淀粉酶K36的剩余活性之间的关系的图；图5是说明沸石处理浓度与根据本发明所述的碱性溶解淀粉酶K38的剩余活性之间的关系的图；图6是说明柠檬酸处理浓度与根据本发明所述的碱性溶解淀粉酶K38的剩余活性之间的关系的图；图7是说明反应pH与根据本发明所述的碱性溶解淀粉酶K36的相对活性之间的关系的图；图8是说明反应pH与根据本发明所述的碱性溶解淀粉酶K38的相对活性之间的关系的图；图9是说明用H₂O₂处理时间与根据本发明所述的每一种碱性溶解淀粉酶(K36和K38)和已知的用于去污剂的淀粉酶的剩余活性之间的关系的图；

实施本发明的最佳方案

此处所用的术语“碱性α-淀粉酶”是指具有碱性范围内的最佳pH值的α-淀粉酶。此处所用的术语“中性”是指pH值范围6-8之间，而术语“碱性”是指pH值范围高于中性。如淀粉酶和相关酶手册中所述的[40-41页，日本淀粉酶研究会(1988)]，术语“溶解α-淀粉酶”是指高度随机地降解淀粉或淀粉多糖的α-淀粉酶。