[发明专利]葡萄的再生系统及其应用

权利要求书

1.产生成熟体细胞胚的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供包含胚胎发生细胞的液体培养物；

(b)从所述培养物回收所述胚胎发生细胞；

(c)将所述胚胎发生细胞转移至第二培养物；和

(d)由所述胚胎发生细胞生长出成熟体细胞胚。

2.权利要求1的方法，其中所述胚胎发生细胞得自花药、子房、胚珠、花组织、营养组织、蔓、叶、根、珠心组织、茎、种子、原生质体、中柱鞘、顶端分生组织、胚胎发生组织、体细胞胚或合子胚。

3.权利要求1的方法，其中所述第二培养物包含含有植物生长调节物的培养基。

4.权利要求3的方法，其中所述植物生长调节物为生长素、NOA、麦草畏、毒莠定、NAA、IAA、2，4-D、细胞分裂素、苄基腺嘌呤、玉米素、噻二唑素、脱落酸或赤霉酸。

5.权利要求1的方法，其中所述胚胎发生细胞用DNA转化。

6.权利要求1的方法，还包括(e)将所述成熟体细胞胚转移至萌发培养基，以生长出葡萄小植株。

7.产生葡萄体细胞胚的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供包含胚胎发生细胞的液体培养物；

(b)从所述培养物中选择所述胚胎发生细胞；

(c)将所述胚胎发生细胞转移至第二培养物；和

(d)由所述胚胎发生细胞生长出葡萄体细胞胚。

8.产生葡萄体细胞胚的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供一种液体培养物，所述液体培养物包含胚胎发生细胞以及包含B-5主要盐和MS次要盐的培养基；

(b)从所述培养物中回收所述胚胎发生细胞；

(c)将所述胚胎发生细胞转移至第二培养物；和

(d)由所述胚胎发生细胞生长出葡萄体细胞胚。

9.权利要求1的方法，其中所述回收的葡萄体细胞胚用DNA转化。

10.权利要求1的方法，其中所述液体培养物包含B-5主要盐和MS次要盐。

11.权利要求1的方法，其中所述第二培养物为液体培养物。

12.权利要求1的方法，其中从所述培养物中回收所述胚胎发生细胞包括过滤、沉降或选择。

13.权利要求1的方法，其中筛分所述第一培养物，以使分化的葡萄体细胞胚的形成同步化。

14.权利要求1的方法，其中所述第二培养物包含固体培养基。

15.按照权利要求1的方法产生的葡萄成熟体细胞胚。

16.由权利要求15的葡萄成熟体细胞胚萌发的小植株。

17.权利要求1的方法，其中步骤(a)的所述胚胎发生细胞得自选自以下的来源：按照权利要求1的步骤(a)和(b)产生的胚胎发生细胞；按照权利要求1的步骤(a)-(d)产生的葡萄体细胞胚；按照权利要求1的方法产生的成熟体细胞胚；按照权利要求1的方法产生的小植株；和从按照权利要求1的方法产生的成熟体细胞胚产生的植株得到的花药、子房、胚珠、花组织、营养组织、蔓、叶、根、珠心组织、茎、种子、原生质体、中柱鞘、顶端分生组织、胚胎发生组织、体细胞胚或合子胚。

18.长期贮存葡萄成熟体细胞胚的方法，所述方法包括将所述胚胎干燥并将所述胚胎贮存于低于8℃的温度。

19.权利要求18的方法，其中所述成熟体细胞胚通过权利要求1的方法产生。

20.直接播种葡萄体细胞胚的方法，包括将所述葡萄体细胞胚置于包含沙和盆栽混合物的盆栽培养基中。

21.选择对植物病原体具有抗性的葡萄体细胞胚的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)在第一液体培养基中培养葡萄体细胞胚，以产生细胞悬浮培养物，所述第一液体培养基包含一种植物生长调节物和植物病原体培养物的滤液；

(b)从所述细胞悬浮培养物回收葡萄细胞或葡萄细胞簇；

(c)在第二液体培养基中培养所述葡萄细胞或葡萄细胞簇，以产生葡萄体细胞胚；和

(d)回收对所述植物病原体具有抗性的葡萄体细胞胚。