[发明专利]植物核黄素生物合成基因及其用途无效

申请号：	99802488.0	申请日：	1999-01-28
公开（公告）号：	CN1289369A	公开（公告）日：	2001-03-28
发明（设计）人：	C·D·谷耶;M·A·约翰逊;S·L·沃拉茨;S·A·布鲁恩;E·R·沃德	申请（专利权）人：	诺瓦提斯公司
主分类号：	C12N15/82	分类号：	C12N15/82;C12N15/54;C12N15/55;C12N9/10;C12N9/14;C12N5/10;C12Q1/68;G01N33/50;A01H5/00
代理公司：	中国国际贸易促进委员会专利商标事务所	代理人：	陈文平
地址：	瑞士***	国省代码：	暂无信息
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摘要：
搜索关键词：	植物核黄素生物合成基因及其用途
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【权利要求书】：

1．包含分离自植物并编码核黄素生物合成所涉及酶的核苷酸序列的DNA分子，其中所述酶具有2，4-二氧四氢蝶啶合成酶活性或GTP环化水解酶II／DHBP合成酶活性。

2．根据权利要求1的DNA分子，其中的酶具有2，4-二氧四氢蝶啶合成酶活性。

3．根据权利要求2的DNA分子，其中所述酶具有与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列基本相似的氨基酸序列。

4．根据权利要求2的DNA分子，其中所述酶含有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列。

5．含有分离自植物并编码具有2，4-二氧四氢蝶啶合成酶活性之酶的核苷酸序列的DNA分子，其中所述DNA分子可在如下条件下与根据权利要求4的DNA分子杂交：在7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0．5MNaPO₄pH7．0，1mM EDTA，50℃杂交；用2X SSC，1％SDS于50℃洗涤。

6．根据权利要求2的DNA分子，其中所述DNA分子可在如下条件下与SEQ ID NO：1所示编码序列杂交：在7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0．5MNaPO₄pH7．0，1mM EDTA，50℃杂交；用2X SSC，1％SDS于50℃洗涤。

7．根据权利要求2的分子，其中所述DNA分子包含与SEQ ID NO：1所示编码序列的一个连续20个碱基对序列相同的一个20个碱基对核苷酸序列。

8．根据权利要求2的DNA分子，其包含SEQ ID NO：1所示的编码序列。

9．根据权利要求1的DNA分子，其中所述酶具有双功能GTP环化水解酶II／DHBP合成酶活性。

10．根据权利要求9的DNA分子，其中所述酶包含与SEQ ID NO：14所示氨基酸序列基本相似的氨基酸序列。

11．根据权利要求9的DNA分子，其中所述酶包含SEQ ID NO：14所示氨基酸序列。

12．含有分离自植物并编码具有双功能GTP环化水解酶II／DHBP合成酶活性之酶的核苷酸序列的DNA分子，其中所述DNA分子可在如下条件下与根据权利要求11的DNA分子杂交：在7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0．5MNaPO₄pH7．0，1mM EDTA，50℃杂交；用2X SSC，1％SDS于50℃洗涤。

13．根据权利要求9的DNA分子，其中所述DNA分子可在如下条件下与SEQ ID NO：13所示的编码序列杂交：在7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0．5MNaPO₄pH7．0，1mM EDTA，50℃杂交；用2X SSC，1％SDS于50℃洗涤。

14．根据权利要求9的DNA分子，其中所述DNA分子包含与SEQ IDNO：13所示编码序列的一个连续20个碱基对序列相同的一个20个碱基对核苷酸序列。

15．根据权利要求9的DNA分子，其包含SEQ ID NO：13所示编码序列。

16．包含与根据权利要求1的DNA分子操作性连接的启动子的嵌合基因。

17．包含根据权利要求16的嵌合基因的重组载体，其中所述载体能被稳定转化至宿主细胞中。

18．包含根据权利要求17的载体的宿主细胞，其中所述宿主细胞能表达编码核黄素合成中涉及的酶的DNA分子。

19．根据权利要求18的宿主细胞，其中所述宿主细胞选自细菌细胞、酵母细胞和植物细胞。

20．根据权利要求19的宿主细胞，其是细菌细胞。

21．制备编码具有改变的2，4-二氧四氢蝶啶合成酶活性的基因产物的核苷酸序列的方法，其包含：

(a)改组根据权利要求2的DNA分子；

(b)表达所获改组核苷酸序列；和

(c)筛选与根据权利要求2的DNA分子所编码酶的活性相比改变的2，4-二氧四氢蝶啶合成酶活性。