[发明专利]生产耐受或抗除草剂的植物的方法

权利要求书

1．一种生产抗或耐受可体外抑制4-羟苯基丙酮酸双加氧酶(4HPPD)的除草剂的植物的方法，该方法包括下列步骤：

(ⅰ)用一种包括编码八氢番茄红素去饱和酶(PDS)的区的多核苷酸来转化植物材料；

(ⅱ)将由此转化的材料再生成形态正常的植物，并从可抗或耐受体外抑制4HPPD的除草剂的那些再生植物群体中进行选择。

2．一种根据权利要求1所述的方法，其中由所述多核苷酸包含的区是SEQ ID No.1所描述的序列或是与在55℃-60℃的温度下和含有0.1％SDS的强度为0.3X的柠檬酸缓冲盐水中温孵、随后在相同温度下用含有0.1％SDS的强度为0.3X的柠檬酸缓冲盐水冲洗时仍然与SEQ ID No.1所描述的序列杂交的一种序列互补的序列。

3．一种根据权利要求1所述的方法，其中所述的八氢番茄红素去饱和酶来源于植物。

4．一种根据权利要求1所述的方法，其中所述的八氢番茄红素去饱和酶来源于细菌。

5．一种根据权利要求4所述的方法，其中所述的八氢番茄红素去饱和酶是从噬夏孢欧文氏杆菌中分离的。

6．一种根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其中所述的多核苷酸进一步包括一种选择标记基因。

7．一种根据权利要求6所述的方法，其中所述的选择标记基因选自下列物质组成的组：赋予抗生素抗性的标记基因、赋予除草剂抗性的标记基因、赋予毒素抗性的标记基因、营养标记、视觉标记和在基于激素的选择系统中所用的标记基因。

8．一种根据权利要求1-7中任意一项所述的方法，其中已经或进一步用下列多核苷酸将所述的植物物质进行了转化：包括编码能够产生具有抗或耐受除草剂、昆虫、脱水和/或真菌、细菌或病毒感染的蛋白质的区的多核苷酸；能够编码可产生改进质量的性状诸如提高的产量、改变的淀粉质量和/或提高的营养含量的蛋白质的多核苷酸。

9．一种根据权利要求1-8中任意一项所述的方法，其中所述多核苷酸内所述蛋白质的编码序列两侧是植物可操作启动子和终止子。

10．一种根据权利要求8或9中之一所述的方法，其中所述的能够产生除草剂抗性的蛋白质选自下列物质组成的组：草甘膦氧化-还原酶(GOX)、5-烯醇-丙酮基-3-磷酸莽草酸合成酶(EPSPS)、膦丝菌素乙酰转移酶(PAT)、羟苯基丙酮酸双加氧酶(HPPD)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、细胞色素P450、乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)、乙酰乳酸合酶(ALS)、原卟啉原氧化酶(PROTOX)、二氢蝶酸合酶、多胺转运蛋白、超氧物歧化酶(SOD)、溴草腈腈水解酶、获自真养产碱杆菌(Alcaligenes eutrophus)的tfdA基因的产物、法尼基焦磷酸合酶和所述蛋白质的已知诱变的或其它修饰的变体。

11．一种根据权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述多核苷酸的蛋白质编码序列包括5’区，该区可编码：(ⅰ)能够将该区翻译产物定向至质粒诸如叶绿体、线粒体、其它细胞器或植物细胞壁的肽；和/或(ⅱ)非翻译的翻译增强序列。

12．一种根据权利要求1-11中任意一项所述的方法，其中对用于转化所述材料的所述多核苷酸进行修饰，因而除去mRNA不稳定性编码基元和/或不规则剪接区；或使用植物优选的密码子以便由此修饰的多核苷酸在植物中的表达产生基本上类似的蛋白质，该蛋白质具有基本上与通过表达编码未修饰多核苷酸区的蛋白质是内源性的生物体中未修饰的多核苷酸而获得的活性/功能类似的活性/功能，条件是如果-就除草剂抗性授予区而言-由此修饰的多核苷酸包括植物优选的密码子，那么编码所述修饰的多核苷酸内区的蛋白质与编码所述植物内内源性包含的区和基本上编码相同蛋白质的类似的蛋白质之间的同一性程度低于约70％。