[发明专利]重组α－L－艾杜糖苷酸酶,其生产和纯化的方法以及治疗其缺乏导致的疾病的方法

权利要求书

1．一种产生α-L-艾杜糖苷酸酶的方法，其特征在于，该方法包含用编码全长α-L-艾杜糖苷酸酶或其生物活性片段或突变体的cDNA转化合适的细胞系。

2．如权利要求1所述的方法，其特征在于，合适的细胞系是中国仓鼠卵巢细胞系2.131。

3．如权利要求2所述的方法，其特征在于，该方法中的中国仓鼠卵巢细胞分泌比引入编码全长α-L-艾杜糖苷酸酶、或其生物活性片段的cDNA之前分泌的α-L-艾杜糖苷酸酶大约多5,000到7,000倍的α-L-艾杜糖苷酸酶。

4．如权利要求1所述的方法，其特征在于，转染细胞生长在微载体上。

5．如权利要求1所述的方法，其特征在于，将培养系统优化成使产生过程中的培养pH降低到大约6.7-6.8。

6．如权利要求1所述的方法，其特征在于，培养系统生长培养基的大约2/3到3/4约每12小时更换一次。

7．如权利要求1所述的方法，其特征在于，将培养系统氧饱和度优化到大约80％。

8．如权利要求7所述的方法，其特征在于，用间歇纯氧喷雾法将培养系统氧饱和度优化到大约80％。

9．如权利要求1所述的方法，其特征在于，用最初含大约10％血清的微载体来产生用于培养系统的大量细胞。

10．如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法还包含冲洗转移到用于生产的无蛋白质培养基上。

11．如权利要求1所述的方法，其特征在于，使用了包含JRH BiosciencesPF-CHO生长培养基的培养系统。

12．如权利要求11所述的方法，其特征在于，优化所述生长培养基为包括补充量的一种或多种选自谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、核糖核苷和脱氧核糖核苷的成分。

13．如权利要求1所述的方法，其特征在于，用灌流棒进行分批加料过程。

14．如权利要求1所述的方法，其特征在于，将丁酸钠加到培养系统中。

15．有产生α-L-艾杜糖苷酸酶能力的转染细胞系。

16．如权利要求15所述的转染细胞系，其特征在于，转染细胞系是一种重组中国仓鼠卵巢细胞系。

17．如权利要求15所述的转染细胞系，其特征在于，该转染细胞系是重组中国仓鼠卵巢2.131细胞系。

18．如权利要求15所述的转染细胞系，其特征在于，该转染细胞系含有至少10个包含CMV启动子、Cα内含子、α-L-艾杜糖苷酸酶cDNA，和牛生长激素聚腺苷酸化序列的表达构建物拷贝。

19．如权利要求15所述的转染细胞系，其特征在于，该转染细胞系表达量至少每天每10⁷细胞表达大约20-40微克的α-L-艾杜糖苷酸酶。

20．一种适应在转染细胞中产生人α-L-艾杜糖苷酸酶的载体。

21．如权利要求20所述的载体，其特征在于，该载体适应在中国仓鼠卵巢细胞CHO中产生人α-L-艾杜糖苷酸酶。

22．如权利要求20所述的载体，其特征在于，该载体包含一个CMV立即早期基因启动子/增强子。

23．如权利要求20所述的载体，其特征在于，该载体包含巨细胞病毒启动子/增强子元件，由外显子2和3之间的鼠Ca内含子构成的5′内含子，编码全长α-L-艾杜糖苷酸酶或其生物活性片段的cDNA和3′牛生长激素聚腺苷酸化位点。

24．一种根据权利要求1所述的方法产生的重组α-L-艾杜糖苷酸酶。

25．一种根据权利要求1所述的方法产生的α-L-艾杜糖苷酸酶，其特征在于，该酶具有至少大约每毫克200,000单位比活力。

26．如权利要求25所述的α-L-半乳糖苷酶，其特征在于，该酶具有至少大约每毫克240,000单位的比活力。