[发明专利]液体介质中天然胶原蛋白的灭菌方法、所获得的无菌天然胶原蛋白、含有所获得的无菌天然胶原蛋白的组合物和应用

说明书

蛋白、含有所获得的无菌天然胶原蛋白的组合物和应用

本发明涉及制备胶原蛋白的方法，包括所述胶原蛋白的灭菌步骤，涉及由此获得的无菌胶原蛋白，涉及所述组合物和应用，特别是药用组合物和/或parapharmaceutical组合物和/或内科-外科组合物和/或眼科组合物和/或化妆品组合物及其应用。

在诸如Collagen，第1、2、3卷，Marcel E.Nimni.,CRC Press Inc,1988和Methods in Enzymology，第144卷，1987和第82卷，Leon W.Gunningham(编辑)的文献中已经一般描述了胶原蛋白及其应用。

众所周知，胶原蛋白是一种在大多数人类和动物组织中存在的、并且特别是在皮肤、腱和胎盘中发现的具有三维结构的分子。

其各种已知的特性特别是增加水分、血液凝固和伤口愈合。

例如在文献US-A-4,515,637中所述的，为了保持其止血作用，一般希望在将胶原蛋白给予人体内之前，保持胶原蛋白的天然形式。

此外，由于其应用，特别是其医学和/或化妆品应用，胶原蛋白必须无任何污染(病毒、细菌、朊病毒等)。在现有技术中已经用各种方法考察了胶原蛋白的灭菌，数年来面对新的挑战(由于胶原蛋白的天然来源，传播AIDS、Creutzfeldt-Jakob病等的风险)。

固体形式的胶原蛋白的灭菌技术包括特别是按照文献FR-A-2,393,581应用环氧乙烷或例如在文献EP-A-0,224,453中描述的辐射(应用β或γ电离辐射)。后一文献描述了基于胶原蛋白的海绵型的化妆品应用和药物用途，该文献建议以干燥形式灭菌，因为根据该文献，对加入乳液或溶液中的可溶性天然胶原蛋白灭菌是不可能的。

文献EP-A-0,664,132描述了一种用于外科应用的胶粘组合物，所述组合物基于通过氧化切割改性的非交联胶原蛋白。该文献中描述的组合物的一个最佳实施方案包括通过氧化切割制备非交联类型Ⅰ胶原蛋白[lacuna]的无菌粉末，然后通过在搅拌下加热至60℃将该粉末溶于无菌超滤水中。该文献指出，由于进行受控加热，所述胶原蛋白丧失其螺旋结构并且转化为明胶。此外，该文献解释到，该文献中的代表现有技术水平的基于交联胶原蛋白的所述胶粘组合物不易于处理，造成应用和机械强度的问题。

文献EP-A-0,667,352描述了一种用于溶液中胶原蛋白的碱处理，以便消除可能的朊病毒。为了避免所述朊病毒的残留污染的所有风险，该文献更具体地指出了一种方法，包括通过酶消化或通过碱切割连接胶原蛋白链的共价键从而溶解组织提取的胶原蛋白，然后通过过滤去除组织碎片，并且将由此溶解的胶原蛋白经过碱处理。

文献FR-A-2,586,703指出透明的基于Ⅳ型胶原蛋白的生理凝胶或胶原蛋白溶液的制备。然而，该文献指出，由于Ⅰ型、Ⅱ型或Ⅲ型胶原蛋白在中性pH下几乎不溶，因此仅允许生产半透明的悬浮液，并且不进行胶原蛋白分子的化学改性不可能使用它们制备透明的生理凝胶，而这些可能使得它们具有抗原性和/或毒性。

该现有技术的内容和通过研究工作的研究已经使得本发明人展示迄今在制备无菌天然胶原蛋白、特别是Ⅰ型胶原蛋白方面仍存在以下困难和问题：

^*处理

-天然胶原蛋白的高粘度，这在进行过滤、特别是直接过滤常规的液体介质中的天然胶原蛋白方面造成技术限制。

^*变性

-在各种通常的灭菌处理期间天然胶原蛋白部分或总的热变性，这引起例如部分或全部丧失其结构和/或其有益特性，诸如吸收、机械强度和增加水分。

-通过辐射(电离辐射)或用环氧乙烷灭菌，这引起例如溶液中待与胶原蛋白一起混合的有益的活性成分(诸如抗生素)变质和/或引起基于天然胶原蛋白的常规凝胶分离为两相，使得它不适用于商业用途。

-通过持续的碱处理引起的变性。

^*毒性和/或污染(病毒、朊病毒)

-在通过该方法灭菌的制品中存在痕量残留的环氧乙烷/在起始的粗胶原蛋白中存在污染物。

^*不相容性

-例如中性pH下可溶的有益活性成分(诸如抗感染剂)和在酸性介质中可溶的胶原蛋白之间pH的不相容性。

^*格林制剂

-基于天然胶原蛋白的制剂的外观不能令人满意，它具有纤维性的不均一的外观。