[发明专利]肽

说明书

发明概要

本发明涉及作为由基因移码突变引起的蛋白产物的片段的肽，这些肽可引起T细胞免疫，本发明还涉及包含所述肽的用于抗癌治疗的癌疫苗和组合物。

本发明还涉及鉴定这些作为基因移码突变引起的蛋白产物片段的肽的方法，所述肽可引起对抵抗所述突变基因相关的癌症有用的T细胞免疫。

本发明还涉及编码至少一个移码突变肽的DNA序列，以及包含至少一个插入位点的载体，所述插入位点含有编码至少一个移码突变肽的DNA序列。

本发明进一步涉及治疗或预防基因移码突变相关癌症的方法，所述方法通过施用至少一个移码突变肽、或包含至少一个插入位点的重组病毒载体、或含有编码至少一个移码突变肽的DNA序列的分离的DNA序列来进行，其中所述插入位点含有编码至少一个移码突变肽的DNA序列。

本发明代表基于应用肽产生激活和强化机体自身免疫系统T细胞的抗癌活性的抗癌治疗或预防的进一步发展。

技术背景肿瘤抗原现状：

目前已在广谱的癌症类型中表征了多种T细胞识别抗原。根据其表达，这些抗原可划分为若干主要类群。发育分化有关抗原(睾丸肿瘤抗原、癌胚抗原等，如MAGE抗原和CEA)和组织特异分化抗原(酪氨酸酶、gp100等)构成了两个主要类群。含有真正肿瘤特异抗原的类群含有由于其编码基因突变而改变的蛋白质。在大多数情况下，突变是独特的，并在单个或少数肿瘤中检测到。这些抗原有几个似乎在肿瘤形成中起作用。癌疫苗现状：

癌疫苗开发的焦点是在一种形式的癌(如黑素瘤)或多种癌中高度表达的抗原。其原因之一是为了增加加入到临床研究中的患者数。该领域正处于快速发展期，这由目前在NCI的PDQ数据库中注册的癌疫苗方法列表就可以说明。可遗传的癌/癌基因检测：

遗传形式的癌在人群中以一定的频率发生。对于若干这些形式的癌症，已对其根本遗传缺陷作图。在构成可遗传癌重要类群的Lynch综合症癌中也是如此。在患有该综合症的家族中，家族成员遗传编码DNA错配修复(MMR)酶的缺陷基因。这种MMR缺陷的携带者常常会患有结肠直肠癌(HNPCC)或其他形式的癌(表？)。MMR酶中的突变可以以检测其它癌相关基因相同的方式采用基因检测来检测。

在这种情况下危险人群的基因检测处于一个无药的困境，因为不存在预防治疗可接受的形式。目前，手术除去有患癌危险的器官成为唯一的治疗选择。在这些患者中，只要能开发有效的疫苗，癌疫苗将是非常(有意义的)预防形式。

错配DNA有效修复的缺乏在DNA一条链中导致缺失和插入，这种情况尤其在含有重复单元(重复序列)的DNA节段中发生。迄今，焦点集中在非编码微卫星座位中的重复序列。的确，微卫星不稳定性是MMR缺陷引起的癌症的特征。我们则采取了另一种途径，集中到在编码致癌过程有关蛋白的DNA序列中发生的移码突变。这种移码突变在蛋白质的C端产生全新的氨基酸序列，并在新终止密码子出现的地方过早地终止。这导致两个重要的结果：

1)移码产生的截短蛋白质通常是没有功能的，在大多数情况下导致一项重要的细胞功能的“敲除”。异常蛋白质也可能获得新的功能如聚集并形成斑的能力。在这两种情况下移码都会导致疾病。

2)阅读框移动产生的新的短C端氨基酸序列(“移码序列”)对机体而言是外源的。在突变前它并不存在，而且仅在含有突变的细胞即肿瘤细胞及其前恶性祖细胞中存在。因为它们是全新的，因而对携带者的免疫系统来说是外源的，所以它们可被携带者体内的T细胞识别。到目前为止，没有人集中在移码突变的这个方面，也没有描述蛋白质编码区的移码肽作为肿瘤抗原的报道。因此这个概念是新颖的，它形成了开发基于这些序列的疫苗的基础。然后，这些疫苗也可在遗传了属于MMR机制的缺陷酶的人中预防性地使用。因此这种疫苗将填补遗传形式癌症的治疗方法中的空白。

已显示细胞内“自身”蛋白质的单氨基酸替代可产生的肿瘤排斥抗原，由与正常肽在其氨基酸序列上不同的肽组成。识别肿瘤细胞表面主要组织相容性复合物(MHC)中的这些肽的T细胞能杀死这些肿瘤细胞，从而从宿主中排斥肿瘤。

典型地，B细胞产生的抗体识别天然构象的游离抗原，进一步可识别抗原表面暴露的几乎任何位点，相比之下，T细胞只有在抗原被MHC分子结合和呈递时才识别抗原，通常这种结合只有在适当的抗原加工之后才发生，抗原加工包括该蛋白质的蛋白水解断裂，以便获得的肽片段适合MHC分子的裂隙。由此T细胞也能识别来自细胞内蛋白的肽。因此，T细胞能识别无论来自肿瘤细胞何处的肿瘤细胞表面MHC分子中的异常肽，并能随后被激活以清除含有异常肽的肿瘤细胞。