[发明专利]分枝杆菌的突变株及其在潜在抗生素载体筛选中的应用

权利要求书

1．分枝杆菌突变体，其特征在于通过基因置换、删除失活或插入失活，使参与分枝菌素的生物合成的基因被灭活或/和编码铁外螯合素依赖的摄铁体系组分的基因被除去。

2．权利要求1的分枝杆菌突变体，其特征在于参与分枝菌素生物合成的基因已被灭活。

3．权利要求2的分枝杆菌突变体，特征在于其基因的灭活通过以下方法之一完成：a)利用化学或物理突变原产生突变，b)通过基因替换，c)通过插入或删除失活，d)综合以上几种方法。

4．权利要求1的分枝杆菌突变体，其特征在于一个或多个编码铁外螯合素依赖的摄铁体系组分的基因已通过基因替换，删除或插入的方法去除，另外，还视需要使参与分枝菌素生物合成的基因失活。

5．权利要求1的分枝杆菌突变体，其特征在于其在分类上属于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)、草分枝杆菌(M.phlei)、母牛分枝杆菌(M.vaccae)、金色分枝杆菌(M.auram)、偶发分枝杆菌(M.fortuitum)、龟分枝杆菌(M.chelonae)、牛分枝杆菌(M.bovis)、鸟分枝杆菌(M.avium)、新金色分枝杆菌(M.neoaurum)、M.gordonae、M.flavescens、结核分枝杆菌(M.tuberculosis)或其他形成外铁载体的分枝杆菌菌株。

6．权利要求1的耻垢分枝杆菌突变体M24(DSM 12084)。

7．权利要求1的耻垢分枝杆菌突变体B1(DSM 12085)，其特征在于通过质粒pGS31上的插入片段同fxbA同源重组，mc²155菌株的fxbA基因被卡那霉素抗性基因替换，如图3所示。

8．权利要求1的耻垢分枝杆菌突变体B3，其特征在于通过质粒pGS31上的插入片段同fxbA同源重组，M24菌株的fxbA基因被卡那霉素抗性基因替换，如图3所示。

9．权利要求1的耻垢分枝杆菌突变体U1，其特征在于通过质粒pGS22上的插入片段同fxuA同源重组，M24菌株的fxuA被卡那霉素抗性基因替换，如图4所示。

10．权利要求1的耻垢分枝杆菌突变体U5，其特征在于通过质粒pGS52上的插入片段同fxuC同源重组，M24菌株的fxuC表达被来自pUC44的卡那霉素抗性基因的整合所打断，如图5所示。

11．权利要求1的耻垢分枝杆菌突变体U7，其特征在于通过质粒pGS56上的插入片段同基因fuxD同源重组而使其被部分删除，如图6、7所示。

12．一种检测潜在的抗生素载体的方法，其特征在于使用了权利要求1-11的突变体，可检出不依赖于铁外螯合素/分枝菌素转运系统在分枝杆菌细胞中转运的铁载体。

13．一种权利要求12的方法，其特征在于测试过程通过在固体或液体培养基上进行的生长刺激实验而完成。