[发明专利]检测啤酒腐败乳酸细菌的抗体,使用该抗体的检测方法,和使用该抗体的试剂盒

说明书

技术领域    

本发明涉及识别能在啤酒中生长的啤酒腐败乳酸细菌的抗体，使用该抗体检测啤酒腐败乳酸细菌的方法，和鉴定啤酒腐败乳酸细菌的试剂盒。

背景技术

有一种意识到的危险，即一旦某些类型的乳酸细菌污染啤酒生产的过程，则由该细菌引起的浑浊，味道不正等等可能会损害生产出的啤酒的质量。例如，有代表性的啤酒腐败乳酸细菌包括一些属于乳杆菌属的乳酸细菌菌种，特别是属于短乳杆菌和林氏乳杆菌那些，以及包括一些属于片球菌属的乳酸细菌菌种。因此，曾试图开发快速而且高敏感性的检测这些啤酒腐败乳酸细菌的方法。

具体提到的是一种方法，其中用膜过滤器过滤要分析的啤酒之后，在合适的培养基中培养并且观察生长的菌落。但是，因为啤酒中存在的啤酒腐败菌存在的量小，而且它们在培养基中生长慢，使用该方法存在检测它们的敏感性和费时性的问题。

开发出了应用抗原-抗体反应检测啤酒中啤酒腐败乳酸细菌的方法。例如，制备出了抗乳酸细菌的多克隆抗体(抗血清)(Sharpe,M.E.,遗传微生物学杂志(J.Gen.Microbiol.),12,107(1955)；Sharpe,M.E.,国际系统细菌学杂志(Int.J.Syst.Bacteriol.),20,509(1970)；Knox,M.W.等，感染免疫学(Infect.Immun.),24,12(1979)；Shimohashi,H.和Mutai,M.,J.Gen.Microbiol.,103,337(1977)；和日本未审专利申请公开平4-72570)。现在，通过调节各种条件，有可能制备这样一种品质的抗血清，使得它们的特异性和它们的敏感性在一定程度上为实际应用所接受。但是其中在下面的几方面还存在期望的进一步改进：抗体滴定度或抗血清的特异性不可避免地随着批次而不稳定；抗某种类型乳酸细菌的抗血清对抗非啤酒腐败菌也呈现阳性；一些抗血清需要NaOH处理。

因为这些原因，提出过使用单克隆抗体的检测方法(日本未审专利申请公开平6-46881和日本未审专利申请公开平6-105698)。根据日本未审专利申请公开平6-46881的描述，使用属于乳杆菌属第3族并且在培养基中培养的短乳杆菌属，丘状菌落乳杆菌和猪双臼乳杆菌作为抗原制备单克隆抗体；并且使用这些单克隆抗体来检测啤酒中的第3族的乳杆菌属。

但是证明在啤酒生产中生长的乳酸细菌只是属于乳杆菌属第3族的那些的一部分。因此，根据日本未审专利申请公开平6-46881描述的方法的问题是也可以检测到其它非啤酒腐败乳酸细菌，即用该方法获得假阳性结果。

根据日本未审专利申请公开平6-105698的描述，使用属于乳杆菌属并且在培养基中培养的植物乳杆菌属作为抗原制备单克隆抗体；使用该单克隆抗体检测啤酒中的乳杆菌和棒状乳杆菌。但是该公开的抗体具有相同的也检测非啤酒腐败乳酸细菌的问题(假阳性)。

因此，提出过只检测可以在啤酒中生长的啤酒腐败细菌的方法(下文称之为“啤酒腐败能力”)(日本未审专利申请公开平10-104238)。根据日本未审专利申请公开平10-104238中描述的方法，使用在缺氧条件下不具备葡萄糖同化作用能力并且在培养基中培养的短乳杆菌作为抗原用兔制备抗血清；使用该抗血清检测具有啤酒腐败能力的短乳杆菌。据信这样制备的抗血清特异性地与短乳杆菌和有害片球菌反应，这两者都引起啤酒腐败能力。

尽管如此，根据日本未审专利申请公开平10-104238中描述的方法，为了从抗血清中去除与短乳杆菌属反应的非特异性抗体(即与非啤酒腐败乳酸细菌反应的非特异性抗体)，必须使用碱处理过的非啤酒腐败短乳杆菌通过吸附来有效去除非特异性抗体。另外，存在一个问题，就是以要用作抗原的短乳杆菌为基础，得到的抗血清倾向于假性识别。此外，既然使用抗血清，其抗体滴定度和特异性不可避免地批次与批次之间不稳定。

提到的作为代表性啤酒腐败乳酸细菌是林氏乳杆菌；但是在日本未审专利申请公开平10-104238中没有提到该抗血清抗这样的细菌的效力。

综上所述，在发酵工业需要改进的检测使啤酒腐败的细菌的方法。

本发明的公开

本发明的一个目的是提供能检测使啤酒腐败损害啤酒质量的乳酸细菌的试剂。

本发明的另一个目的是提供一种特异性的，快速，方便和可重复检测在啤酒生产过程中污染的且在生产出的啤酒中生长的并降低啤酒质量的啤酒腐败乳酸细菌的方法。

本发明的另一个目的是提供一种有效而彻底地检测例如短乳杆菌，林氏乳杆菌或有害片球菌的啤酒腐败乳酸细菌的方法。