[发明专利]通过胞质内精子注射进行哺乳动物基因转移

权利要求书

1.一种获得转基因胚胎的方法，该方法包括下列步骤：

将外源核酸和膜受破坏的精子头或脱膜精子头共同插入未受精的卵母细胞中，形成受精的转基因卵母细胞；和

使受精的转基因卵母细胞发育成转基因胚胎。

2.根据权利要求1所述的方法，其中共同插入步骤用压电驱动的显微注射来实现。

3.根据权利要求2所述的方法，其中将外源核酸和膜受破坏的精子头共同注射到未受精卵母细胞的胞质内。

4.根据权利要求1所述的方法，其中膜受破坏的精子头从经过冷冻和融化的精子获得。

5.根据权利要求1所述的方法，其中膜受破坏的精子头从重新水化的冷冻干燥的精子获得。

6.根据权利要求1所述的方法，其中精子头是包含胞核和核周物质的脱膜的头部。

7.根据权利要求6所述的方法，其中膜受破坏的精子头从经洗涤剂处理的精子获得。

8.根据权利要求1所述的方法，其中未受精的卵母细胞是中期II的卵母细胞。

9.根据权利要求1所述的方法，其中共插入步骤包括首先使膜受破坏的或脱膜的精子头与外源核酸预培育第一段时间的分步骤。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述第一段时间为30秒至5分钟。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一段时间为45秒至3分钟。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述第一段时间为1分钟至2分钟。

13.根据权利要求1所述的方法，其中外源核酸包含多个转基因。

14.根据权利要求1所述的方法，该方法还包括使转基因胚胎发育成活后代的步骤。

15.根据权利要求14所述的方法，其中使胚胎发育的步骤包括将转基因胚胎移植到代孕母亲体内的分步骤。

16.根据权利要求1所述的方法，其中卵母细胞和精子头来自哺乳动物。

17.根据权利要求15所述的方法，其中哺乳动物选自灵长类动物、羊、牛、猪、熊、猫、狗、马和啮齿类动物。

18.根据权利要求1所述的方法，其中卵母细胞和精子头来自无脊椎动物。

19.根据权利要求1所述的方法，其中卵母细胞和精子头来自鱼类、两栖动物、爬行动物或鸟类。

20.根据权利要求1所述的方法，其中卵母细胞和精子头来自海胆、龙虾、鲍鱼或有壳的水生动物。

21.一种获得转基因胚胎的方法，该方法包括下列步骤：

获得膜受破坏的或脱膜的精子头；

将膜受破坏的或脱膜的精子头与含有所需基因的外源核酸混合；

将该混合物共同注射到分离的未受精的中期II的卵母细胞中，形成受精的转基因卵母细胞；和

使受精的转基因卵母细胞发育成转基因胚胎。