[发明专利]用于繁殖突变疱疹病毒的细胞系

说明书

发明领域

本发明涉及用于培养突变疱疹病毒的细胞系。本发明尤其涉及培养在这样的基因具有突变的病毒：所述基因是必需结构蛋白，但也具有其它功能，所述基因的失活妨碍病毒生长。本发明提供了增强具有这种失活突变的病毒的生长的细胞系，其中所述病毒具有所述突变的方式使病毒中失活的功能不能通过病毒序列与细胞系中的互补序列的同源重组而得到修复。此外，本发明还提供了可以用于培养突变疱疹病毒的细胞系，所述疱疹病毒在某些立即早期基因上有缺陷，并且在必需结构蛋白上存在突变。

发明背景

已经提出疱疹病毒是用于基因传递的有潜力的载体。例如，不是对于神经系统或体内的其它地方为基因治疗、疫苗或其它目的是这样，就是对于培养中的细胞或动物疾病模型也是这样。虽然由于HSV可以在体外和在体内感染广泛多种细胞类型，并且可以接受大的DNA插入以允许传递多个基因，因而具有作为载体的多种好处，但HSV对大多数细胞类型的感染会导致裂解性复制或所述病毒的其它毒性效应。因此，为用作载体，通常必须以某种方式损伤HSV以预防或最小化这些效应。

可以以多种方法损伤HSV，这包括当在培养所谓扩增子载体中用作辅助病毒时，所述扩增子载体包括含有疱疹原点和包装序列的质粒，所述扩增子载体在转染进允许细胞后能够在辅助病毒存在的情况下复制。例如可以失活在所有细胞类型中复制所需的基因，为在培养物中生长，必须互补这些基因，所述基因包括必需立即早期基因ICP4或ICP27中的一个或另一个或二者。或者可以除去在体内发病需要但对于在培养物中生长非必需的基因，如ICP34.5或ICP6，同样可以除去其缺失进一步降低毒性的其它基因。这些可以包括例如其它IE基因ICP0、ICP22和ICP47，除非这些失活也在用于培养病毒的细胞系中得到互补，否则ICP0和/或ICP22的失活降低病毒在培养物中复制的效率。因此，产生有效并且实用的载体病毒取决于在靶细胞类型中合适地最小化毒性的平衡，以及取决于在培养物中培养病毒的能力，在一些情况下需要使用至少互补病毒中一些失活突变的细胞系。作为一般性的原则，病毒中突变的数目越大，所述病毒越难在培养物中生长。HSV载体在Coffin和Latchman，1996中一般性综述。

从上面可以看出，在产生HSV载体时，需要失活的特别具有吸引力的基因是五个IE基因中的一个或多个基因，因为这些基因的失活也会降低其表达受到这些IE基因产物刺激的其它蛋白的水平，至少对ICP0、ICP4、ICP22或ICP27来说是这样。然而，假如失活这些基因，在培养物中的复制将或者被阻断(ICP4和ICP27)，或者被减弱(ICP0和ICP22)，因此，为进行有效的复制，必须在用于培养病毒的细胞系中互补所失活的基因。

然而，另一种可以降低有功能的IE蛋白的水平而不是在所述IE基因本身中包括失活突变的方法是在编码VP16的基因(Ace等，1988)中包括失活突变。VP16是一种毒粒蛋白，它与细胞的因子一起在感染后引起HSV IE基因启动子的反式激活。因此，在VP16中包括特异性失活突变产生IE基因的表达降低但未完全阻断的病毒(Ace等，1989)。这在产生HSV载体病毒时可能是有利的，因为在一个基因(VP16)中一种功能的失活导致多个IE基因表达水平降低。