[发明专利]生长抑素基因工程体及其活载体疫苗

摘要

本发明生长抑素基因工程体及其活载体疫苗,属于生物技术高科技研究领域。将合成的SS基因连接于乙肝表面抗原(HBsAg)基因上,构建成HBs/ss融合基因。然后将其克隆到痘苗病毒表达载体(pGJP－5)中,与痘苗病毒同源重组,筛选出能表达HBsAg/ss融合蛋白的重组痘苗病毒(vv-HBs/ss)。将此基因工程体在鸡胚绒毛尿膜上增殖后,制成生长抑素基因工程活载体疫苗。经农业部审批为安全等级Ⅰ级,同意进行中间试验。试验结果表明,本疫苗生产工艺简便,不造成环境污染,免疫猪、牛、羊等家畜安全有效。于1999年月12月经农业部审批。同意在川、苏2省商品化生产(农基安审定99B－03—09)。

主权项

1、用于生长抑素(SS)基因工程活载体疫苗的基因工程体——重组痘苗病毒(vv-HBs/SS)，其构建方法为：1、1)SS基因合成和克隆SS为14个氨基酸残基组成的短肽，其氨基酸序列和密码子如下：1234567891011121314AlaGlyCysLysAanPhePheTrpLysThrPheThrSerCys5′-CCTGGCTGCAAGAACTTCTTCTGGAAGACTTTCACATCCTGT-3′用380型DNA自动合成仪合成A52和A232个两端有酶切位点的SS基因片段：A525′-GGATCCGATGGCTGGCTGCAAGAACTTCTTCTGGAAGACTTTCACATCCTGT3′-AAGTGTAGGACAATCATTCGAAA-5′A23将2条合成单链摩尔等混合，退火，补齐，即成两端有粘性末端的SS基因，并将其基因克隆于pUC12，获得带SS基因的pUC12-SS质粒：BamHI1234567891011121314stop5′-GGATCCGATGGCTGGCTGCAAGAACTTCTTCTGGAAGACTTTCACATCCTGTTAGTAAGCTTT-3′CCTAGGCTACCGACCGACGTTCTTGAAGAAGACCTTCTGAAAGTGTAGGACAATCATTCGAAHindIII1、2)SS基因与HBsAg融合基因的构建从带HBs基因的pWR13-HBs/4经改造成PWR13-HBs/6后，从中切下7000bp的HBs基因片段，将其插入pUC12-ss质粒，构建成带HBs/ss嵌合基因的pUC12-HBs/ss质粒；1、3)HBs/ss表达质粒的构建将HBs/ss嵌合基因克隆到痘苗病毒表达载体pGJP-5的启动子P7.5之后，获得pGJP-HBs/ss质粒；1、4)带HBs/ss基因的重组痘苗病毒克隆将pGJP-HBs/ss转染，经痘苗病毒感染的CV-1细胞，由于该质粒中外源基因插入部位的两侧带有痘苗病毒TK基因的同源序列，因同源重组而获得带HBs/ss基因的重组痘苗病毒(vv-HBs/ss)。