[发明专利]液－固萃取体系分离纯化血红蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种用液－固萃取体系从血液中分离纯化血红蛋白的方法。本发明方法所需设备简单,分离纯化成本低,速度快,成相容易,成相后直接倾出液相即可使液固两相分离,无须双水相萃取中的离心等操作,不用有机溶剂,无毒性,成相聚合物及盐对蛋白质有稳定和保护作用。萃取分离选择性好,萃取容量大,是易于规模放大分离纯化血红蛋白的新技术。本发明用PEG修饰物混合聚合物－盐－水液－固萃取体系对猪血、牛血、人血中血红蛋白进行萃取,经过一次萃取,一次反萃和透析即可得到纯度大于99%的血红蛋白的水溶液。

主权项

1、一种液-固萃取体系分离纯化血红蛋白的方法，包括如下步骤：(1)、在具塞比色管中，加入无机盐，pH控制在3.0～9.0，加入成相聚合物溶液和聚乙二醇(PEG)8000或聚乙二醇(PEG)6000修饰物溶液，然后加入血样，用二次水定容，置于康氏电动震荡机上，平置振荡2-10分钟，取下倒置10-20分钟，体系分成聚合物固相和盐水液相，血红蛋白被萃入固相；(2)、在上述固相加二次水溶解后，加入乙二胺四乙酸和无机盐，置于康氏电动震荡机上，平置振荡2-10分钟，取下倒置10-20分钟，体系分成聚合物固相和盐水液相，血红蛋白被反萃入液相；(3)、将上述萃入液相的血红蛋白置于透析袋中进行透析，小分子的盐、少量聚合物可以通过透析袋，而留在透析袋中血红蛋白大分子，其纯度可达到99％以上。