[发明专利]痕量二恶英的生物检测方法

摘要

本发明公开了一种痕量二恶英的生物检测方法，属于包含有核酸的检测方法。本发明依据芳烃受体在二恶英的活化作用下与芳烃受体核转位蛋白特异性结合的分子机制，利用pGEX－5X－1质粒分别克隆表达ARNT和AhR的片段AhR 1的融合蛋白，并用AhR 1免疫家兔制备抗体；将融合蛋白ARNT与含有生物活性的AhR的鼠肝细胞浆提取液进行温育结合，加入不同浓度的TCDD。采用免疫印渍等方法研究AhR与ARNT结合的程度与TCDD的剂量反应关系。本发明方法易于操作、能节省大量的经济成本和时间成本，适合于日常检测和普查工作，在食品卫生、环境卫生以及职业卫生检测等领域有着广泛的应用前景。

主权项

1.一种痕量二恶英的生物检测方法，其特征在于：a.小鼠肝组织中抽提总RNA，通过逆转录PCR扩增目的基因AhR、ARNT、AhR1，酶切产物纯化后与pGEX-5X-1质粒进行连接，构建了含外源目的基因的重组质粒；b.制备感受态细胞及转化重组质粒，进行融合蛋白GST-AhR、GST-ARNT、GST-AhR1的诱导表达与纯化；c.将大量表达的ARNT全长融合蛋白GST-ARNT与从C57BL/6J纯系小鼠中提取的富含AHR的胞浆提取液在TCDD存在的条件下温育结合，得到二聚体复合物；d.利用Glutathione Sepharose 4B珠子对该二聚体复合物进行亲和吸附，用目的蛋白GST-AhR1制备的多克隆免疫血清为一抗，通过免疫印渍方法对二聚体复合物的结合情况进行检测。