[发明专利]一种人类重大病原菌－霍乱弧菌快速检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明提供一种人类重大病原菌—霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的快速检测试剂盒及检测方法。该试剂盒及检测方法是以霍乱弧菌16S－23SrRNA间区基因保守区序列设计的一对引物为主体而设计的。本发明采用聚合酶链式反应(PCR)技术，对人类的病原菌—霍乱弧菌的特异性DNA片断进行定性检测，简便快速，特异性好，灵敏度高；可用于人类烈性肠道传染病霍乱的临床检测，也用于水产动物各时期养殖过程中的细菌跟踪检测，还可以用于环境监测，避免病菌传播流行，具有很高的实用价值。

主权项

1.一种人类重大病原菌-霍乱弧菌的快速检测试剂盒，由如下试剂组成：(a)DNA提取试剂：含缓冲试剂A和细胞裂解试剂B，试剂A：含有NaCl 0.1-0.3M、pH8.0的三羟基甲基氨基甲烷1-100mM、pH8.0的乙二胺四乙酸0.1-10mM和V/V浓度为0-20％的曲拉通X-100；试剂B：含有浓度为1-10mg/ml的溶菌酶和pH8.0、浓度为1-100mM的三羟基甲基氨基甲烷；(b)聚合酶链式反应试剂：含有反应预混试剂C和反应引物试剂D，试剂C：含有10倍聚合酶链式反应缓冲液、热聚合酶和灭菌双蒸水，含量分别为2.5-5.0μl、0.5-2.5个单位和18-35.5μl；试剂D：含有特异引物对VcF和VcR、dNTP(四种脱氧核苷酸的混合物)及MgCl2，含量分别为0.2-1μM和0.2-1μM、20-200μM及0.5-10mM；(c)电泳和显色试剂，含试剂E和试剂F，试剂E：为50倍电泳缓冲液，含三羟基甲基氨基甲烷-乙酸和乙二胺四乙酸，浓度分别为0.04M和0.001M；试剂F：含W/V为0.8-2％的琼脂糖和0.5-20μg/ml溴化乙锭；所述VcF特指5′-TTAAGCSTTTTCRCTGAGAATG；所述VcR特指5′-AGTCACTTAACCATACAACCCG。