[发明专利]人乳头瘤病毒16型外壳蛋白病毒样颗粒及其制备方法和用途有效
| 申请号： | 200610127387.2 | 申请日： | 2006-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN101148661A | 公开（公告）日： | 2008-03-26 |
| 发明（设计）人： | 许雪梅;许于飞;张洪涛;宋国兴;司静懿;刘世德 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院基础医学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N15/866;C12N15/12;C07K19/00;C12N1/21;C12N5/10;C12N7/01;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 程伟 |
| 地址： | 1000*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及人乳头瘤病毒16型病毒样颗粒，及其生产方法和用途，在生产中使用了对N端改造的主要衣壳蛋白基因和C末端融合改造的大肠杆菌热不稳定肠毒素LTK63的次要衣壳蛋白L2融合基因；在杆状病毒一昆虫细胞表达体系中生产L1NVLPs、L1N/L2VLPs和L1N/L2－LTK63嵌合病毒样颗粒(cVLPs)。源自HPV16L1N基因的病毒样颗粒产量高；本发明还涉及所述病毒样颗粒在制备疫苗中的应用，该疫苗免疫原性好，可预防HPV16感染及相关病变。 | ||
| 搜索关键词： | 乳头 病毒 16 外壳 蛋白 颗粒 及其 制备 方法 用途 | ||
【主权项】：
1.一种病毒样颗粒，其特征在于该病毒样颗粒由选自序列为SEQ ID N0.1的HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或核苷酸序列为SEQ ID NO.2的HPV16L1N/L2-LTK63嵌合基因所编码，该病毒样颗粒由下列步骤获得：1)使用pFastBacDual-HPV16L1N、pFastBacDual-HPV16L1N/L2或pFastBacDual-HPV16L1N/L2-LTK63linkB重组质粒分别转化感受态大肠杆菌DH10Bac；2)筛选鉴定获得分别重组有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重组Bacmid；3)将所述重组Bacmid转染对数生长期的昆虫细胞，转染后收集上清，获得含有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重组杆状病毒；4)用所述含有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重组杆状病毒感染对数生长期的Sf9昆虫细胞，使重组杆状病毒在感染细胞内分别表达导入的HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63基因；5)裂解感染有含HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重组杆状病毒的细胞，纯化获得HPV16L1NVLPs、HPV16L1N/L2VLPs或HPV16L1N/L2-LTK63嵌合病毒样颗粒。
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