[发明专利]葡萄酒中DNA的简单快速提取方法

摘要

葡萄酒中DNA的简单快速提取方法，包括以下步骤：A用纯水将5g的Silica清洗干净，加入5ml水悬浮Silica沉淀，混匀，置4℃备用；B建立最佳吸附条件的葡萄酒；C葡萄酒DNA的吸附及回收：(1)向上述葡萄酒混合液中加入Silica悬浮液；(2)4℃下保育1－2小时，不断摇晃、振荡；(3)离心，5000g，5min，4℃；(4)弃上清液，用含0.1M Tris－HCl，pH 8.0，1％CTAB，1M NaCl的冲洗液短暂冲洗Silica沉淀1－2次；(5)离心，5000g，5min，收集Silica沉淀；(6)向上述Silica沉淀加入等量的纯水，摇匀，于65℃保温5－10min热洗脱DNA；(7)离心(10000g，5min)收集含有DNA的上清液；(8)等体积氯仿抽提步骤(7)的上清液，离心10000g，3min，收集含有DNA上相；(9)用异内醇沉淀法回收、浓缩上清液中DNA；(10)回收的葡萄酒DNA溶于50μlTE(10mM Tris－HCl，pH 8.0)缓冲液。

主权项

1.葡萄酒中DNA的简单快速提取方法，包括以下步骤：A用纯水将5g的Silica清洗干净，加入5ml水悬浮Silica沉淀，混匀，置4℃备用；B建立最佳吸附条件的葡萄酒在磁力搅拌器上缓慢加入下列制剂调节葡萄酒：1)加入10N的NaOH溶液调节葡萄酒的pH为8.0左右；2)加入CTAB至1％(w/v)；3)加入NaCl至1.0M；4)加入巯基乙醇至0.2％(v/v)；C葡萄酒DNA的吸附及回收(1)向上述葡萄酒混合液中加入Silica悬浮液；(2)4℃下保育1-2小时，不断摇晃、振荡；(3)离心，5000g，5min，4℃；(4)弃上清液，用含0.1M Tris-HCl，pH 8.0，1％CTAB，1M NaCl的冲洗液短暂冲洗Silica沉淀1-2次；(5)离心，5000g，5min，收集Silica沉淀；(6)向上述Silica沉淀加入等量的纯水，摇匀，于65℃保温5-10min热洗脱DNA；(7)离心(10000g，5min)收集含有DNA的上清液；(8)等体积氯仿抽提步骤(7)的上清液，离心10000g，3min，收集含有DNA上相；(9)用异丙醇沉淀法回收、浓缩上清液中DNA；(10)回收的葡萄酒DNA溶于50μl TE(10mM Tris-HCl，pH 8.0)缓冲液。