[发明专利]一种土壤羟胺还原酶活性检测时的显色方法

摘要

本发明涉及一种土壤羟胺还原酶活性检测时的显色方法，具体地说是在土壤培养后的提取液中加入三价铁盐溶液和α－α’联吡啶溶液并在微酸性环境下显色，然后应用分光光度法比色测定提取液中的羟胺浓度。将其吸光值同标准曲线进行对比得到培养液中的羟胺浓度，从而计算得到土壤中羟胺还原酶的活性。显色反应在常温下进行，所得溶液显橙色，比色波长为520nm。如果在40min内不能完成比色，应加入掩蔽剂阻止副反应发生。改进后的显色方法同传统的显色方法比较，具有灵敏度高、系统误差较小、准确度和精密度高、显色剂用量较少等优点，使分析结果更加精确可靠，分析重现性更好。

主权项

1.一种土壤羟胺还原酶活性检测时的显色方法，其特征在于：1)取0.5-1.0g风干土壤置于100ml带磨口塞得瓶中，加入10-20mg碳酸钙，仔细混合均匀；然后加入1-2ml 0.5-1％的盐酸羟胺溶液和1-2ml 1％的葡萄糖溶液；在10-12mm水银柱的压力下抽出瓶中空气；将瓶仔细摇匀，并在30±1℃恒温箱中放置5±0.2h；用灭菌土壤加试剂作为对照；在培养结束后，向瓶中加入50ml蒸馏水和2-3ml铝钾矾饱和溶液，摇均后用致密滤纸过滤得提取液；2)取土壤培养后的提取溶液1ml于50ml容量瓶中，加入含Fe3+0.002-0.01mol·L-1的三价铁盐溶液1-5ml、0.8-2.0g·L-1α-α’联吡啶溶液1-5ml，然后用蒸馏水定容至刻度，显色反应在常温下进行，所得溶液显橙色，显色达到稳定，在520nm下用分光光度计比色测定其吸光值为A；3)在520nm下比色测定一系列两组或两组以上已知浓度的羟胺溶液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00gNH2OH 1·L-1的吸光值A’，以羟胺溶液的浓度和测定的吸光值A’制作标准曲线，得到斜率b；4)根据吸光值A和斜率b，计算提取液中的羟胺浓度S：S＝A*b，其中，A为提取液的吸光值，b为标准曲线的斜率；5)计算样品中的羟胺浓度；计算羟胺还原酶活性，计算公式为：[(S1-S)V1V2/1000V3]/W，单位mgNH2OH·g-1soil·5h-1；式中，S1为对照中的NH2OH含量(mg·L-1)；S为样品中的NH2OH含量(mg·L-1)；V1为提取液总体积(ml)；V2为显色时定容后的溶液体积(ml)；1000为单位转换系数；V3为测定时所取滤液体积，W为称土样重(g)。