[发明专利]一种新型烟叶发酵酶制剂生产方法

摘要

“一种新型烟叶发酵酶制剂生产方法”目的是解决烟叶自然发酵领域中如何改善烟叶发酵品质及实现烟叶发酵酶制剂活性保护技术问题。该酶制剂由葡萄糖氧化酶、叶绿素氧化酶、类胡萝卜素氧化酶、蛋白酶及烟碱降解酶组成。新鲜烟叶经细胞破碎后，先用(NH₄)₂SO₄进行二次分级沉淀获得粗酶液，酶分子采用Ca²⁺和Mg²⁺进行金属离子置换，完成分子修饰；大分子结合修饰采用0.01％蔗糖低聚物完成，由此延长酶制剂的半衰期及显著提高其耐高温能力。该酶制剂施用的试验结果表明，烟碱下降9.3％，总氮下降5.7％，蛋白质下降7.1％；烟气总粒相物下降8.4％，焦油量下降5.1％，烟气烟碱量下降28.0％，一氧化碳下降1.6％。该酶制剂在烟叶打叶复烤前的二润时施用。

主权项

1.一种用于烟叶发酵的专用复合酶制剂，该酶制剂由葡萄糖氧化酶、叶绿素氧化酶、类胡萝卜素氧化酶、蛋白酶及烟碱降解酶五类酶组成，其各组分的酶活比为：葡萄糖氧化酶12354，叶绿素氧化酶368，类胡萝卜素氧化酶231，蛋白酶36310，烟碱降解酶186；其制备方法如下：选取新鲜烟叶，组织匀浆，酶群经两次(NH4)2SO4分级沉淀纯化后得到粗酶液；该粗酶液用含0.1％EDTA的缓冲液进行酶金属离子螯合，螯合条件pH8.0，1-5℃，螯合时间10-20min；然后用0.3％Ca(NO3)2·4H2O和MgSO4进行离子置换，置换条件按粗酶液∶置换溶液1∶0.001体积比反应，1-5℃，置换时间8-12hr或过夜，完成酶分子修饰；经修饰的酶分子，于1-5℃条件下用0.01％蔗糖低聚物进行二次修饰保护，反应时间至少10hr以上；经过这样处理，即可获得所述的用于烟叶发酵的耐高温专用复合酶制剂。