[发明专利]马铃薯病毒和类病毒检测试剂盒及应用

摘要

本发明公开了马铃薯病毒和类病毒的复合RT－PCR检测试剂盒及其应用。本发明试剂盒采用了特异的引物组合进行复合逆转录和PCR反应，可以快速、准确、灵敏的同步检测出马铃薯X病毒，马铃薯Y病毒，马铃薯A病毒，马铃薯S病毒，马铃薯卷叶病毒和马铃薯纺锤块茎类病毒。本发明试剂盒引入了来自马铃薯本身基因的mRNA作为内对照，用于监测马铃薯病毒和类病毒复合检测的过程，解决了马铃薯病毒和类病毒复合RT－PCR分子检测中易出现假阴性结果的问题，同时设置了无侵染活性的阳性对照，用于监督试剂盒试剂的质量。本发明试剂盒操作简便、快速，成本低，可广泛应用于脱毒马铃薯种薯和种苗的室内检测、生产田检测、抗毒病毒材料的鉴定、筛选及植物检验检疫等方面。

主权项

1.一种马铃薯病毒和类病毒的复合RT-PCR检测试剂盒，由组分I和组分II组成；组分I和组分II中的各试剂单独分装，组分I由将马铃薯病毒或类病毒RNA逆转录为cDNA第1链的必需试剂所组成，包括：逆转录酶、RNA酶抑制剂，dNTP混合物，检测对象的cDNA第1链的互补引物，反应缓冲液；组分II由进行PCR扩增的必需试剂所组成，包括：PCR反应缓冲液，dNTP混合物，MgCl2，Taq DNA聚合酶，PCR复合引物组合；其特征在于：所述的检测对象的cDNA第1链的互补引物是由以下7个引物按照任意比例组成的混合物：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ IDNO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：14；所述的PCR复合引物组合是由以下7对引物所组成：SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：2(引物对1)；SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4(引物对2)；SEQ ID NO：5、SEQID NO：6(引物对3)；SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8(引物对4)；SEQ ID NO：9、SEQ IDNO：10(引物对5)；SEQ IDNO：11、SEQ IDNO：12(引物对6)；SEQ IDNO：13、SEQ ID NO：14(引物对7)。