[发明专利]荧光纳米显微方法

摘要

本发明涉及借助荧光显微镜对由荧光着色剂染色的物体实施分析。显微镜包括用于使样本图像可视化并将其投射到摄像机上的光学系统、用于记录和处理图像的计算机、布置在样本透镜前面的样本保持器以及荧光放射源。单独荧光可视的分子和纳米颗粒在物体不同的部分周期性的形成。激光产生的振荡足以记录所述分子和纳米颗粒的非重叠图形并使已经得到记录的荧光分子脱色。所记录的单个分子和纳米颗粒图像的画面通过计算机进行处理，以研究应变中心的坐标并根据与各个荧光分子和纳米颗粒的坐标相对应的应变中心的计算坐标建立物体图像。所述本发明可以获得分辨率大于20纳米的二维和三维图像并通过用不同的着色剂使蛋白质、核酸和脂类染色来记录彩色图像。

主权项

1.一种对染色物体进行纳米显微的方法，所述物体被放置在溶液中或作为保存样本的切片被放置在聚合物上，所述方法采用荧光显微镜，其装有具有抑制滤色器的数字摄像机，用于吸取物体的荧光，所述摄像机能够(以低噪声级)检测由激光激发的各个荧光分子的图像，显微镜还装有用于记录从摄像机接收到的图像的计算机；其特征在于，1-2千不发荧光的染料分子通过UV闪光周期性地被转化成发荧光的染料分子，这些分子覆盖物体结构，所述分子被转化成发荧光的分子是因为阻碍荧光的化学基团与它们分离，所形成的荧光分子的图像在摄像机帧上作为单个点得到检测，所述分子在检测的过程中释放颜色并且具有剩余荧光的帧被从包含荧光颗粒和剩余荧光混合物的帧中减去，被减去的帧保存在计算机存储器内以发现代表染料分子坐标的点的中心，这一过程被重复多次以计算在物体光照区域中所有染料分子的坐标并以大于20-50纳米的分辨率重建物体的2-D或3-D图像。