[发明专利]具有新切割特异性的I－CreI归巢核酸内切酶变体及其用途

摘要

一种改造出能够切割突变的I－CreI位点的I－CreI归巢核酸内切酶变体的方法，所述位点在±8到±10位有改变。本发明涉及可获得自所述方法的I－CreI归巢核酸内切酶变体、编码所述变体的载体、经所述载体修饰的细胞、动物或植物。所述I－CreI核酸内切酶变体及其衍生产物在遗传工程、基因组治疗和抗病毒治疗中的用途。

主权项

1.一种改造出具有经修饰的切割特异性的I-CreI归巢核酸内切酶变体的方法，其包括至少以下步骤：(a)用选自A、C、D、E、G、H、K、N、P、Q、R、S、T、L、V、W和Y的氨基酸替换I-CreI中β1β2发夹的K28、N30、Y33、Q38和/或S40中至少一个氨基酸，(b)选择和/或筛选来自步骤(a)的能够切割DNA靶序列的I-CreI变体，所述靶序列由突变的I-CreI位点组成，其中至少-9到-8位的aa核苷酸二联体和/或+8到+9位的tt核苷酸二联体被不同的核苷酸二联体所替换。