[发明专利]一种载脂蛋白－J的制备方法有效
| 申请号： | 200710007353.4 | 申请日： | 2007-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN101082045A | 公开（公告）日： | 2007-12-05 |
| 发明（设计）人： | 耿永健 | 申请（专利权）人： | 耿永健 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N15/12;C07K14/435;C12N1/21;C07K1/14;C12N15/85 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 | 代理人： | 丁纪铁 |
| 地址： | 美国得*** | 国省代码： | 美国;US |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种载脂蛋白—J的制备方法，其特征在于：a.采用RT－PCR技术从RNA克隆并扩增出载脂蛋白－J的全长或部分片段的互补脱氧核糖核酸cDNA；b.利用DNA重组技术将载脂蛋白－J cDNA全长或部分片段插入到一个质粒构成原核或真核细胞表达载体并连接6个组氨酸尾6HisTa；c.将此载脂蛋白－J原核表达质粒载体转染大肠杆菌，在抗菌素选择培养基中培养此转染的细菌以扩增载脂蛋白－J表达质粒；d.收集转染的菌体，离心沉淀，裂解释放载脂蛋白－J；e.将此载脂蛋白－J真核表达质粒载体转染哺乳动物细胞；f.用Ni－NTA树脂从细菌中抽提或细胞培养基上清含有连续6个组氨酸尾6HisTag的具有天然结构的可溶性重组载脂蛋白－J；g.用亲和层析方法纯化；h.对纯化载脂蛋白－J生物活性鉴定及检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 脂蛋白 制备 方法 | ||
【主权项】：
1、一种载脂蛋白-J的制备方法，其特征在于以下工艺步骤：a、采用脱氧核糖核酸DNA重组技术制备重组人或哺乳动物的载脂蛋白-J全长或部分片段并用亲和层析法纯化；b、采用逆转录-多聚脱氧核糖核酸合成酶链反应RT-PCR技术从RNA克隆并扩增出载脂蛋白-J的全长或部分片段的互补脱氧核糖核酸cDNA；c、利用DNA重组技术将载脂蛋白-J cDNA全长或部分片段插入到一个质粒构成原核或真核细胞表达载体，载脂蛋白-J cDNA连接或不连接于一个标签多肽基因；d、将此载脂蛋白-J表达质粒载体转染大肠杆菌，在抗菌素选择培养基中培养此转染的细菌以扩增载脂蛋白-J表达质粒，根据质粒所含抗菌素阻抗基因，抗菌素可选为氨苄青霉素或/和氯霉素，在培养基中诱导重组载脂蛋白-J的合成；e、收集转染的菌体，离心沉淀，裂解释放载脂蛋白-J，用制备层析方法分离载脂蛋白-J；f、用Ni-NTA树脂从细菌中抽提含有连续6个组氨酸尾6HisTag的具有天然结构的可溶性重组载脂蛋白-J；g、用亲和层析方法纯化，鉴定重组载脂蛋白-J；对纯化载脂蛋白-J生物活性鉴定及检测。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于耿永健，未经耿永健许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/200710007353.4/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：内置清洗机构的新型玻璃壁面吸附装置
- 下一篇：氧含量检测装置及其方法
