[发明专利]利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法

摘要

一种利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法，主要内容包括：甘露糖筛选体系的建立，基因枪转化和抗性愈伤组织的获得，抗性愈伤组织的分化筛选，抗性苗的获得和生根，抗性再生苗的分子检测和氯酚红法检测法检测pmi基因表达。本发明转化周期短，选择标记系统具有产物安全、选择程序简单、筛选效果显著而且不影响转化植物的代谢平衡等优点，并且检测手段快速、灵敏、可信度高的。利用该技术12周即可获得大量的目标转基因再生苗，解决了转基因安全问题。

主权项

1. 一种利用pmi基因快速获得转基因甘蔗的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)抗性植株的获得：切取经消毒处理后直径为0.4～0.8cm，厚为1～2mm的甘蔗新叶，接种于诱导培养基上，于暗室中培养，培养温度为25±1℃，每15d继代一次；选择生长良好的甘蔗胚性愈伤组织作为转基因受体，将构建好的含pmi基因的植物表达载体pUP，利用基因枪转导或农杆菌介导法转化甘蔗细胞；将基因枪轰击后的胚性愈伤组织放入高渗培养基中10～20小时后转入继代培养基中培养2～10天，后转入总碳源为10g的含甘露糖继代培养基中进行筛选，26～28℃黑暗培养10～20天；之后将生长良好的愈伤组织转接到分化培养基中进行分化6～8周，培养12 h·d-1，光照度1000～2000Lux，培养温度为26～28℃；待苗长至6～8cm时转接到生根培养基中促根培养，获得抗性植株；(2)转基因植株的快速检测：采用氯酚红(chlorophenol red，CPR)法，将待测组织接种到含有甘露糖和氯酚红的MS液体培养基中，在黑暗条件下，20～35℃培养1～5d后，观察培养基颜色变化，培养基颜色变成黄色或橙色，则pmi基因已成功导入。